DMEM: DMEM:Ham's F12 (1:1)، ث: 3.1 جم/لتر جلوكوز، ث: 2.5 ملي مولار جلوتامين، ث: 15 ملي مولار هيبيس (15 ملي مولار هيبيس)، ث: 0.5 ملي مولار بيروفات الصوديوم، ث: 1.2 ملي مولار/لتر NaHCO3
DMEM: يعتبر وسط DMEM: F12 من هام F12 هو وسط قاعدي معروف على نطاق واسع ويستخدم على نطاق واسع في زراعة الخلايا للأبحاث البيولوجية. ويُستخدم كمصدر أساسي للمغذيات لنمو خطوط خلايا الثدييات المختلفة، خاصةً عندما يُضاف إليه مصل البقر الجنيني (FBS).
وتجمع هذه التركيبة الفريدة من نوعها بين وسط النسر المعدل من دولبيكو المعدل (DMEM) ومزيج مغذيات هام F-12 (خليط مغذيات هام F-12) بنسبة 1:1 دقيقة. وتعزز إضافة L-الجلوتامين من تركيبته.
يوفر DMEM، المشتق من وسط إيجل الأساسي الأدنى (EMEM)، تركيزًا متزايدًا من الأحماض الأمينية والفيتامينات مقارنةً بسابقه. وعلى النقيض من ذلك، يعتمد وسط هام F-12 على وسط هام F-10، مما يوفر مجموعة تكميلية من المكونات الأساسية.
لدعم النمو الأمثل للخلايا، من الممارسات الشائعة إضافة وسط DMEM:Ham's F12 بتركيز نموذجي يتراوح بين 5-10%. وتُعد هذه الإضافة ضرورية لأن الوسط يفتقر إلى هرمونات النمو والدهون والبروتينات الضرورية للنمو الخلوي.
ويتضمن DMEM:F12 لحم الخنزير F12 نظامًا عازلًا للأس الهيدروجيني وغالبًا ما يُستكمل بالفينول الأحمر، وهو مؤشر للأس الهيدروجيني. تتطلب الخلايا المستزرعة في DMEM:Ham's F12، أو أي وسط يستخدم نظام مخزن بيكربونات العازل، بيئة محكومة من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5-10% للحفاظ على مستويات الأس الهيدروجيني المناسبة.
مراقبة الجودة
- معقمة ومفلترة
التخزين ومدة الصلاحية
- يُحفظ في درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجة مئوية، مع حمايته من الضوء.
- بمجرد فتحه، يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويستخدم خلال 6-8 أسابيع.
ظروف الشحن
- درجة الحرارة المحيطة
الصيانة
- يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجات مئوية في الظلام. تجنب التجميد والتسخين المتكرر إلى +37 درجة مئوية، لأنه يقلل من جودة المنتج.
- لا تقم بتسخين الوسيط أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة غير منضبطة مثل أجهزة الميكروويف.
- في حالة استخدام جزء فقط من الوسيط، يجب إزالة الكمية المطلوبة وتسخينه إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
التركيب
| الفئة | المكونات | التركيز (ملغم/لتر) |
| الأحماض الأمينية | الجلايسين | 18.75 |
| ل-ألانين | 4.45 | |
| إل-أرجينين حمض الهيدروكلوريك | 147.50 | |
| إل-أسباراجين H₂O↩O | 7.50 | |
| ل-حمض الأسبارتيك | 6.65 | |
| ل-سيستين حمض الهيدروكلوريك H₂O | 17.56 | |
| إل-سيستين 2 حمض الهيدروكلوريك | 31.29 | |
| ل-حمض الجلوتاميك | 7.35 | |
| ل-جلوتامين | 365.00 | |
| ل-هيستيدين هيدروكلوريد الهيدروجين H₂O↩O | 31.48 | |
| ل-إيسولوسين | 54.47 | |
| ل-ليوسين | 59.05 | |
| ل-ليسين حمض الهيدروكلوريك | 91.25 | |
| ل-ميثيونين | 17.24 | |
| ل-فينيل ألانين | 35.48 | |
| ل-برولين | 17.25 | |
| ل-سيرين | 26.25 | |
| ل-ثريونين | 53.45 | |
| ل-تريبتوفان | 9.02 | |
| ل-تيروزين ملح ثنائي الصوديوم | 48.10 | |
| ل-فالين | 52.85 | |
| فيتامينات | د-بيوتين | 0.0035 |
| كلوريد الكولين | 8.98 | |
| د-بانتوثينات الكالسيوم | 2.24 | |
| حمض الفوليك | 2.66 | |
| ميو إينوزيتول | 12.60 | |
| نيكوتيناميد النيكوتيناميد | 2.02 | |
| البيريدوكسين حمض الهيدروكلوريك | 0.031 | |
| بيريدوكسال حمض الهيدروكلوريك | 2.00 | |
| ريبوفلافين | 0.219 | |
| ثيامين حمض الهيدروكلوريك | 2.17 | |
| فيتامين B12 | 0.68 | |
| الأملاح غير العضوية | CaCl₂ 2 H₂O | 154.50 |
| CuSO₄ 5 H₂O | 0.0013 | |
| الحديد(NO₃)₃ 9 H₂O | 0.05 | |
| FeSO₄ 7 H₂O | 0.417 | |
| كلوريد الكالسيوم | 311.80 | |
| مغ كلوريد المغنيسيوم 6 H₂O | 61.20 | |
| المغنيسيوم المغنيسيوم₄ | 48.84 | |
| كلوريد الصوديوم | 6996.00 | |
| NaHCO₃ | 1200.00 | |
| Na₂HPO₄HPO₄ | 71.02 | |
| NaH₂PO₄PO₄ | 54.30 | |
| ZnSO₄ 7 H₂O | 0.432 | |
| مكونات أخرى | د-الجلوكوز | 3151.00 |
| هايبوكسانثين | 2.40 | |
| هيبيس | 3574.50 | |
| حمض اللينوليك | 0.042 | |
| حمض الليبويك | 0.105 | |
| ملح الصوديوم الفينول الأحمر الفينول | 8.63 | |
| بوتريسين 2 حمض الهيدروكلوريك | 0.081 | |
| بيروفات الصوديوم | 55.00 | |
| ثيميدين | 0.365 |