الوسط 199، ث: 2.7 مللي مولار جلوتامين مستقر، ث: 2.2 جم/لتر NaHCO3، ث: EBSS
الوسيط 199 هو وسيط زراعة خلايا متعدد الاستخدامات ومستخدم على نطاق واسع، صُمم خصيصاً لزراعة المستنبتات الأولية. ويجمع هذا الوسط الشامل بين الفيتامينات الأساسية والأحماض الأمينية وعوامل أخرى لتوفير مصدر غذائي محدد بالكامل لمجموعة متنوعة من أنواع الخلايا. وهو مناسب بشكل خاص للخلايا غير المتحولة، مما يجعله أداة لا تقدر بثمن للأبحاث البيولوجية.
يوفر الوسيط 199 مجموعة من التطبيقات في هذا المجال. ويمكنه الحفاظ بفعالية على مركب الخلايا الملقية-الخلايا الخلوية (COC) ودعم نضوج البويضات في المختبر. بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدامه في شطف خطوط الشفط أثناء جمع البويضات من أبقار الهولشتاين الألمانية. وعلاوة على ذلك، يُستخدم الوسيط 199 كوسيط ممتاز لزراعة الخلايا البطانية القلبية المشتقة من الفئران. تُظهر هذه التطبيقات تعدد استخدامات الوسيط 199 وقدرته على التكيف مع الاحتياجات التجريبية المختلفة.
التاريخ
شكّل تطوير الوسيط 199 في خمسينيات القرن الماضي تقدماً كبيراً في وسائط زراعة الأنسجة. وقبل طرحه، اعتمدت العديد من وسائط الاستزراع على المنتجات المشتقة من الحيوانات ومستخلصات الأنسجة. ومع ذلك، أحدث مورغان وزملاؤه ثورة في هذا المجال من خلال صياغة مصدر غذائي محدد تمامًا لمزارع الخلايا. من خلال تجاربهم التي شملت تركيبات مختلفة من الفيتامينات والأحماض الأمينية وعوامل أخرى، اكتشفوا الخصائص الاستثنائية المعززة للنمو في الوسيط 199.
مراقبة الجودة
- الأس الهيدروجيني = 7.2 +/- 0.02 عند درجة حرارة 20-25 درجة مئوية.
- تم اختبار كل كمية للتأكد من العقم وغياب الميكوبلازما والبكتيريا.
الصيانة
- يُحفظ في الثلاجة عند +2 درجة مئوية إلى +8 درجة مئوية في الظلام. يقلل التجميد والتسخين حتى +37 درجة مئوية من جودة المنتج.
- لا تقم بتسخين الوسط إلى أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة لا يمكن التحكم فيها (مثل أجهزة الميكروويف).
- إذا كنت تريد استخدام جزء فقط من الوسيط، أخرج هذه الكمية من الزجاجة وقم بتسخينها في درجة حرارة الغرفة.
- مدة الصلاحية لأي وسيط باستثناء الوسيط الأساسي هي 8 أسابيع من تاريخ التصنيع.
التركيب
| المكونات | ملغم/لتر | |
| الأملاح غير العضوية | كلوريد الكالسيوم × 2H2O | 264,92 |
| نترات الحديد (III) x 9H2O | 0,72 | |
| كبريتات المغنيسيوم | 97,67 | |
| كلوريد البوتاسيوم | 400,00 | |
| أسيتات الصوديوم x 3H2O | 82,95 | |
| كلوريد الصوديوم | 6,800.00 | |
| فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم × H2O | 140,00 | |
| مكونات أخرى | كبريتات الأدينين | 10,00 |
| AMP | 0,20 | |
| أدينوسين ثلاثي الفوسفات | 1,00 | |
| الكوليسترول | 0,20 | |
| 2'-ديوكسي ريبوز 2' | 0,50 | |
| د(+)-جلوكوز اللامائية | 1,000.00 | |
| جلوتاثيون (أحمر) | 0,05 | |
| غوانين × حمض الهيدروكلوريك | 0,30 | |
| هايبوكسانثين | 0,30 | |
| الفينول الأحمر | 10,00 | |
| د- ريبوز | 0,50 | |
| ثايمين | 0,30 | |
| توين 80 | 4,90 | |
| يوراسيل | 0,30 | |
| زانثين | 0,30 | |
| هيدروكسيد الصوديوم | 2,200.00 | |
| الأحماض الأمينية | ل-ألانين | 25,00 |
| ل-أرجينين × حمض الهيدروكلوريك | 70,00 | |
| ل-حمض الأسبارتيك | 30,00 | |
| إل-سيستين × حمض الهيدروكلوريك × حمض الهيدروكلوريك | 0,10 | |
| ل-سيستين | 20,00 | |
| ل-جلوتامين مستقر | 149,00 | |
| إل-جلوتاميك أسيد | 67,00 | |
| جلايسين | 50,00 | |
| ل-هيستيدين × حمض الهيستيدين × حمض الهيدروكلوريك × H2O | 21,88 | |
| ل-هيدروكسي برولين | 10,00 | |
| ل-إيسولوسين | 20,00 | |
| ل-لوسين | 60,00 | |
| ل-ليسين × حمض الهيدروكلوريك | 70,00 | |
| ل-ميثيونين | 15,00 | |
| ل-فينيل ألانين | 25,00 | |
| ل-برولين | 40,00 | |
| ل-سيرين | 25,00 | |
| ل-ثريونين | 30,00 | |
| ل-تريبتوفان | 10,00 | |
| ل-تيروزين | 40,00 | |
| ل-فالين | 25,00 | |
| فيتامينات | 4-أمينو حمض البنزويك | 0,05 |
| حمض الأسكوربيك | 0,05 | |
| د(+)-بيوتين | 0,01 | |
| كالسيفيرول | 0,10 | |
| د-كالسيوم بانتوثينات الكالسيوم | 0,01 | |
| كلوريد الكولين | 0,50 | |
| حمض الفوليك | 0,01 | |
| ميو إينوزيتول | 0,05 | |
| ميناديون | 0,01 | |
| حمض النيكوتينيك | 0.025 | |
| نيكوتيناميد النيكوتيناميد | 0.025 | |
| بيريدوكسال × حمض الهيدروكلوريك | 0.025 | |
| بيريدوكسول × حمض الهيدروكلوريك | 0.025 | |
| ريبوفلافين | 0,01 | |
| ملح ثنائي الصوديوم DL-α-Tocopherol فوسفات ثنائي الصوديوم | 0,01 | |
| ثيامين × حمض الهيدروكلوريك | 0,01 | |
| أسيتات فيتامين أ | 0,14 |