Médium 199, w: 2,7 mM stabilní glutamin, w: 2,2 g/l NaHCO3, w: EBSS
Médium 199 je univerzální a široce používané médium pro kultivaci buněk speciálně vytvořené pro kultivaci primárních explantátů. Toto komplexní médium kombinuje esenciální vitaminy, aminokyseliny a další faktory a poskytuje tak plně definovaný zdroj živin pro různé typy buněk. Je obzvláště vhodné pro netransformované buňky, což z něj činí neocenitelný nástroj pro biologický výzkum.
Médium 199 nabízí celou řadu aplikací v této oblasti. Dokáže účinně udržovat komplex kumulus-oocyt (COC) a podporovat in vitro zrání oocytů. Kromě toho se používá při oplachování aspiračních linií během odběru vajíček od německých holštýnských krav. Medium 199 navíc slouží jako vynikající médium pro kultivaci srdečních endoteliálních buněk získaných z potkanů. Tyto aplikace ukazují univerzálnost a přizpůsobivost média 199 různým experimentálním potřebám.
Historie
Vývoj média 199 v 50. letech 20. století znamenal významný pokrok v oblasti médií pro tkáňové kultury. Před jeho zavedením se mnoho kultivačních médií opíralo o produkty živočišného původu a tkáňové extrakty. Morgan a jeho kolegové však způsobili revoluci v této oblasti tím, že vytvořili zcela definovaný zdroj živin pro buněčné kultury. Svými pokusy s různými kombinacemi vitaminů, aminokyselin a dalších faktorů objevili výjimečné vlastnosti média 199 podporující růst.
Kontrola kvality
- pH = 7,2 +/- 0,02 při 20-25 °C.
- Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmy a bakterií.
Údržba
- Uchovávejte v chladu při teplotě +2 °C až +8 °C ve tmě. Zmrazování a zahřívání až do +37 °C snižuje kvalitu přípravku na minimum.
- Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37° C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné přístroje).
- Pokud má být použita pouze část média, odeberte toto množství z lahvičky a zahřejte jej při pokojové teplotě.
- Doba použitelnosti jakéhokoli média s výjimkou základního média je 8 týdnů od data výroby.
Složení
| Složení | mg/l | |
| Anorganické soli | Chlorid vápenatý x 2H2O | 264,92 |
| Dusičnan železitý (III) x 9H2O | 0,72 | |
| Síran hořečnatý | 97,67 | |
| Chlorid draselný | 400,00 | |
| Octan sodný x 3H2O | 82,95 | |
| Chlorid sodný | 6,800.00 | |
| Dihydrogenfosforečnan sodný x H2O | 140,00 | |
| Ostatní složky | Adenin sulfát | 10,00 |
| AMP | 0,20 | |
| ATP | 1,00 | |
| Cholesterol | 0,20 | |
| 2'-Deoxyribóza | 0,50 | |
| D(+)-glukóza bezvodá | 1,000.00 | |
| Glutathion (červený) | 0,05 | |
| Guanin x HCl | 0,30 | |
| Hypoxantin | 0,30 | |
| Fenolová červeň | 10,00 | |
| D-ribóza | 0,50 | |
| Thymin | 0,30 | |
| Tween 80 | 4,90 | |
| Uracil | 0,30 | |
| Xanthin | 0,30 | |
| NaHCO3 | 2,200.00 | |
| Aminokyseliny | L-Alanin | 25,00 |
| L-Arginin x HCl | 70,00 | |
| Kyselina L-asparagová | 30,00 | |
| L-Cystein x HCl x H2O | 0,10 | |
| L-Cystin | 20,00 | |
| L-Glutamin stabilní | 149,00 | |
| Kyselina L-glutamová | 67,00 | |
| Glycin | 50,00 | |
| L-histidin x HCl x H2O | 21,88 | |
| L-hydroxyprolin | 10,00 | |
| L-Isoleucin | 20,00 | |
| L-leucin | 60,00 | |
| L-Lysin x HCl | 70,00 | |
| L-methionin | 15,00 | |
| L-fenylalanin | 25,00 | |
| L-Prolin | 40,00 | |
| L-serin | 25,00 | |
| L-Treonin | 30,00 | |
| L-tryptofan | 10,00 | |
| L-Tyrosin | 40,00 | |
| L-Valin | 25,00 | |
| Vitamíny | kyselina 4-amino-benzoová | 0,05 |
| Kyselina askorbová | 0,05 | |
| D(+)-Biotin | 0,01 | |
| Kalciferol | 0,10 | |
| D-pantothenát vápenatý | 0,01 | |
| Cholinchlorid | 0,50 | |
| Kyselina listová | 0,01 | |
| myo-Inositol | 0,05 | |
| Menadion | 0,01 | |
| Kyselina nikotinová | 0.025 | |
| Nikotinamid | 0.025 | |
| Pyridoxal x HCl | 0.025 | |
| Pyridoxol x HCl | 0.025 | |
| Riboflavin | 0,01 | |
| DL-α-tokoferolfosforečnan disodná sůl | 0,01 | |
| Thiamin x HCl | 0,01 | |
| Vitamín A acetát | 0,14 |