Cellules BV2
650,00 €*
Les produits sont expédiés congelés dans de la glace carbonique dans des cryotubes. Chaque cryotube contient généralement 3 × 10 6 cellules pour les lignées adhérentes ou 5 × 106 cellules pour les lignées en suspension (voir le certificat d'analyse du lot pour plus de détails).
Aperçu des cellules BV2
| Description | Les cellules BV2 sont un type de lignée cellulaire microgliale dérivée du murin C57BL/6, une souche de souris de laboratoire largement utilisée pour l'expérimentation animale. Ces cellules microgliales ont été immortalisées à l'aide du rétrovirus J2, qui porte les oncogènes v-raf et v-myc, ce qui permet d'obtenir une lignée cellulaire stable aux caractéristiques uniques. Les cellules BV2 expriment les oncogènes nucléaires v-myc et cytoplasmiques v-RAF, ainsi que l'antigène env gp70 à leur surface, ce qui contribue à leur rôle dans les réponses immunitaires et l'inflammation dans le cerveau. L'un des principaux avantages des cellules BV2 est leur capacité à conserver les caractéristiques morphologiques et fonctionnelles des microglies primaires, les cellules immunitaires résidentes du système nerveux central, ce qui en fait un modèle idéal pour l'étude de la neurodégénérescence et de l'inflammation cérébrale. Le rôle de la microglie dans la neurodégénérescence, la toxicologie et l'immunité, en particulier dans des pathologies telles que la maladie d'Alzheimer, est un domaine de recherche biomédicale en pleine expansion. Les études traditionnelles s'appuient souvent sur des cultures primaires de microglie et des préparations cellulaires continues. L'utilisation d'une lignée cellulaire semblable à la microglie, comme les cellules BV2, offre une alternative prometteuse en fournissant une source continue et reproductible de microglie. Les cellules BV2, grâce à l'expression de v-raf/v-myc, présentent un métabolisme et une croissance accrus, ce qui est idéal pour la recherche sur l'activation microgliale et l'inflammation. Leur expression d'oncogènes et d'antigènes spécifiques reflète celle des macrophages, ce qui les rend précieuses pour l'étude des réponses immunitaires et des mécanismes pathologiques. Une réévaluation récente des cellules microgliales BV2 de souris a permis d'examiner leur aptitude à remplacer la microglie primaire (PM). La réponse des cellules BV2 au lipopolysaccharide a été comparée à celle de la microglie à la fois in vitro et in vivo, mais la régulation à la hausse des gènes a été légèrement moins prononcée en moyenne. Les cellules BV2 ont montré une régulation normale de l'oxyde nitrique et une réponse fonctionnelle à l'IFN-gamma, des paramètres critiques pour leur interaction avec les cellules T, les neurones et d'autres cellules gliales telles que les astrocytes. On a également constaté que les cellules BV2 stimulaient efficacement d'autres cellules gliales, entraînant la production d'interleukine-6 (IL-6) dans les astrocytes. Cette interaction entre les astrocytes et la microglie est cruciale pour comprendre les interactions complexes entre cellules et la réponse inflammatoire dans le cerveau, en particulier dans le contexte de maladies neurodégénératives comme la maladie d'Alzheimer, où des protéines telles que NAPoe31 et NAPoe41, ainsi que des voies telles que la réaction de sursaut et l'apoptose, jouent un rôle important. Les cellules BV2 constituent un outil robuste et fiable pour les chercheurs en biologie microgliale. Leur expression des produits de l'oncogène v-raf/v-myc leur permet de conserver les caractéristiques clés de la microglie et des macrophages. Les cellules BV2 se sont révélées être un substitut valable à la microglie primaire dans divers contextes expérimentaux, facilitant la recherche sur la neurodégénérescence, la toxicologie, l'immunité et les interactions cellule-cellule. |
|---|---|
| Organisme | Souris |
| Tissus | Cerveau |
| Synonymes | BV-2 |
Spécifications
| Race/Sous-espèce | C57BL/6 |
|---|---|
| L'âge | 1 semaine |
| Genre | Femme |
| Morphologie | Morphologie microgliale |
| Propriétés de croissance | Adhérent |
Documentation
| Citation | BV2 (numéro de catalogue Cytion 305156) |
|---|---|
| Niveau de biosécurité | 1 |
| NCBI_TaxID | 10090 |
| CellosaurusAccession | CVCL_0182 |
Génétique de la lignée cellulaire de microglie BV2
Manipulation
| Milieu de culture | RPMI 1640, w : 2.0 mM Glutamine stable, w : 2.0 g/L NaHCO3 (numéro d'article Cytion 820700a) |
|---|---|
| Suppléments | Compléter le milieu avec 10% de FBS |
| Réactif de dissociation | Accutase |
| Sous-culture | Rassembler les cellules en suspension dans un tube de 15 ml et laver délicatement les cellules adhérentes avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium (utiliser 3-5 ml pour les flacons T25 et 5-10 ml pour les flacons T75). Appliquer Accutase (1-2 ml pour les flacons T25, 2,5 ml pour les flacons T75) en veillant à couvrir entièrement la couche cellulaire. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 10 minutes. Après l'incubation, combiner et centrifuger la suspension et les cellules adhérentes. Après centrifugation, remettre soigneusement en suspension le culot cellulaire et transférer la suspension cellulaire dans de nouveaux flacons contenant du milieu frais. |
| Taux de fractionnement | 1 × 104 cellules/cm2 |
| Renouvellement des fluides | 2 à 3 fois par semaine |
| Congélation du milieu | Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation. |
| Décongélation et culture des cellules |
|
| Atmosphère d'incubation | 37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée. |
| Revêtement des flacons | Pour une fixation et une viabilité optimales après décongélation, nous recommandons d'utiliser des flacons ou des plaques recouverts de collagène. |
| Procédure de congélation | Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié. |
| Conditions d'expédition | Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié. |
| Conditions de stockage | Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide. |
Assurance qualité des cellules BV2
| Stérilité | La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence. Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes. |
|---|---|
| Profil STR |
M_18-3: 16,17
M_4-2: 20.3
M_6-7: 15
M_3-2: 14
M_19-2: 13
M_7-1: 26.2
M_1-1: 16,17
M_Sex: x
M_8-1: 16
M_2-1: 16
M_15-3: 22.3,23.3,24.3
M_6-4: 18
M_11-2: 16
M_1-2: 19
M_17-2: 15
M_12-1: 17
M_5-5: 17
M_X-1: 27
M_13-1: 17
Humain D4/D8: -
|
Certificat d'analyse (CoA)
| Numéro de lot | Type de certificat | Date | Numéro de catalogue |
|---|---|---|---|
| 305156-160724 | Certificat d'analyse | 18. Aug. 2025 | 305156 |
| 305156-180324 | Certificat d'analyse | 18. Aug. 2025 | 305156 |
Accord de transfert de matériel
Si vous avez l'intention d'utiliser les lignées cellulaires Cytion uniquement pour la recherche interne sur un seul site de recherche, veuillez remplir et signer notre accord de transfert de matériel (MTA) et le joindre à votre commande.
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Produits requis
Produits requis
Milieu de congélation CM-1 - 50 mlVariantes de milieux de cryoconservation: 50 mlLe milieu de congélation CM-1 de Cytion est un milieu de cryoconservation de pointe conçu pour garantir le plus haut niveau de viabilité et de fonctionnalité des cellules après la décongélation. Ce milieu polyvalent convient à un large éventail de types de cellules, y compris les cellules humaines et animales, ce qui en fait un outil essentiel pour diverses applications de recherche. Formulé avec une combinaison méticuleusement équilibrée de cryoprotecteurs et de nutriments essentiels, le milieu de congélation CM-1 minimise la formation de cristaux de glace et le stress cellulaire pendant le processus de congélation, préservant ainsi l'intégrité cellulaire.
Les principales caractéristiques du milieu de congélation CM-1 sont les suivantes :
Large compatibilité: Efficace pour une large gamme de types de cellules, y compris les cellules primaires, les cellules souches et les lignées cellulaires établies.
Haute viabilité: Optimisé pour maximiser la récupération et la viabilité des cellules après décongélation, garantissant des résultats expérimentaux fiables.
Prêt à l'emploi: Pratiquement préparé et stérilisé pour une application immédiate, réduisant le temps de préparation et le risque de contamination.
Stabilité améliorée: Maintient des performances constantes dans des conditions de cryoconservation standard, garantissant des résultats reproductibles.
Longue durée de conservation: CM-1 est un milieu de cryoconservation contenant du sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.
Utilisation du CM-1 pour la congélation des cellules
Pour utiliser le CM-1 pour congeler des cellules adhérentes ou en suspension, suivre les étapes suivantes
Pour les cellules adhérentes, les laver et les dissocier du substrat de culture. Pour les cellules en suspension, passer directement à l'étape suivante.
Compter les cellules pour s'assurer qu'elles ont la bonne concentration.
Centrifuger les cellules pour les culotter, puis les remettre en suspension dans le milieu de congélation CM-1.
Transférer les cellules remises en suspension dans des cryovials.
Utiliser une méthode de congélation lente avant de transférer les cellules pour un stockage à long terme
Méthode de congélation
Description
Etapes
❄️
Congélation manuelle
Méthode progressive impliquant une réduction graduelle de la température pour assurer la viabilité des cellules
1️⃣ Placer les cellules dans un milieu de congélation dans un congélateur à 4°C pendant 40 minutes.
2️⃣ Transférer dans un congélateur à -80°C pendant 24 heures.
3️⃣ Stocker les cellules dans de l'azote liquide pour une conservation à long terme
❄️
Utilisation de Mr. Frosty
Un appareil pratique qui permet de contrôler les taux de congélation sans alimentation électrique
1️⃣ Préparer les cellules dans des cryovials avec du milieu de congélation.
2️⃣ Placer les cryovials dans le récipient Mr. Frosty.
3️⃣ Conserver à -80°C pendant 24 heures avant de les transférer dans l'azote liquide
❄️
Congélateur à débit contrôlé
Un congélateur de haute précision de Thermo Fisher ou d'autres fabricants, conçu pour une réduction contrôlée de la température
1️⃣ Programmer l'appareil pour réduire progressivement la température.
2️⃣ Placer les cellules préparées dans le congélateur.
3️⃣ Après le cycle de congélation, transférer les cellules dans l'azote liquide
Stocker les cryovials à des températures inférieures à -130°C ou dans de l'azote liquide pour une conservation à long terme.
Ingrédients
Contient du FBS, du DMSO, du glucose et des sels
Pouvoir tampon : pH = 7,2 à 7,6
Le milieu de congélation CM-1 de Cytion offre une solution fiable pour la cryoconservation, garantissant une viabilité cellulaire et une fonctionnalité élevées après décongélation pour une large gamme d'applications de recherche.59,00 €*RPMI 1640, w : 2.0 mM Glutamine stable, w : 2.0 g/L NaHCO3Le milieu RPMI 1640, également connu sous le nom de milieu RPMI, est un milieu de culture cellulaire très polyvalent, largement utilisé dans la recherche biologique pour cultiver diverses cellules de mammifères. Développé par George E. Moore, Robert E. Gerner et H. Addison Franklin en 1966 au célèbre Roswell Park Comprehensive Cancer Center, ce milieu tire son nom de son origine au Roswell Park Memorial Institute (RPMI).
Initialement conçu pour favoriser la croissance de cellules leucémiques humaines en suspension et en monocouche, le milieu RPMI 1640 a évolué au fil des modifications apportées par les chercheurs et les fournisseurs commerciaux pour convenir à une gamme variée de cellules de mammifères. Il est exceptionnellement compatible avec des lignées cellulaires telles que HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytes et carcinomes.
Le milieu RPMI 1640 se distingue des autres milieux de culture cellulaire par sa composition unique. Il contient une quantité substantielle de phosphate, d'acides aminés et de vitamines. Il contient notamment de la biotine, de la vitamine B12 et du PABA, absents du milieu minimal essentiel d'Eagle ou du milieu modifié d'Eagle de Dulbecco. En outre, le milieu RPMI 1640 présente des concentrations significativement élevées de vitamines inositol et choline. Cependant, il ne contient pas de protéines, de lipides ou de facteurs de croissance. Par conséquent, une supplémentation avec 10% de sérum bovin fœtal (FBS) est généralement nécessaire pour fournir des conditions optimales pour la croissance des cellules.
Le système tampon du milieu RPMI 1640 repose sur le bicarbonate de sodium et nécessite un environnement de 5 à 10 % de CO2 pour maintenir un pH physiologiquement approprié. L'inclusion d'un agent réducteur, le glutathion, distingue encore davantage ce milieu des autres.
Contrôle de la qualité
Filtré stérilement
Stockage et durée de conservation
Stocker entre +2°C et +8°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver à 4°C et utiliser dans les 6-8 semaines.
Conditions d'expédition
Température ambiante
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.
Composition
Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)
Acides aminés
Glycine
10.00
L-Alanyl-L-Glutamine
434.40
L-Arginine
200.00
L-AsparagineH2O
56.82
Acide L-Aspartique
20.00
L-Cystine 2HCl
65.20
Acide L-Glutamique
20.00
L-Histidine HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-Proline
20.00
L-Isoleucine
50.00
L-Leucine
50.00
L-Lysine HCl
40.00
L-Méthionine
15.00
L-Phénylalanine
15.00
L-Proline
20.00
L-Sérine
30.00
L-Thréonine
20.00
L-Tryptophane
5.00
L-Tyrosine 2Na 2H2O
28.83
L-Valine
20.00
Vitamines
acide p-amino-benzoïque
1.00
D-Biotine
0.20
Chlorure de choline
3.00
D-Pantothénate de calcium
0.25
Acide folique
1.00
myo-Inositol
35.00
Nicotinamide
1.00
Pyridoxine HCl
1.00
Riboflavine
0.20
Thiamine HCl
1.00
Vitamine B12
0.005
Sels inorganiques
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Autres composants
D-Glucose
2000.00
L-Glutathion réduit
1.00
Sel de sodium du rouge de phénol
5.3025,00 €*AccutaseVariantes: 100 mlRéactif de dissociation cellulaire Accutase
- Une alternative douce à la trypsine
Accutase est une solution de détachement cellulaire qui révolutionne l'industrie de la culture cellulaire. Il s'agit d'un mélange d'enzymes protéolytiques et collagénolytiques qui imite l'action de la trypsine et de la collagénase. Contrairement à la trypsine, Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est beaucoup plus doux pour les cellules, ce qui en fait une solution idéale pour le détachement de routine des cellules du matériel plastique de culture tissulaire standard et du matériel plastique à revêtement adhésif. Dans cet article de blog, nous allons explorer les avantages et les utilisations d'Accutase et la façon dont il change la donne dans la culture cellulaire.
Avantages d'Accutase
Accutase présente plusieurs avantages par rapport aux solutions de trypsine traditionnelles. Tout d'abord, il peut être utilisé chaque fois qu'un détachement doux et efficace d'une lignée cellulaire adhérente est nécessaire, ce qui en fait un substitut direct à la trypsine. Deuxièmement, Accutase fonctionne extrêmement bien sur les cellules souches embryonnaires et neuronales, et il a été démontré qu'il maintient la viabilité de ces cellules après le passage. Troisièmement, Accutase préserve la plupart des épitopes pour une analyse ultérieure par cytométrie de flux, ce qui la rend idéale pour l'analyse des marqueurs de la surface cellulaire.
En outre, il n'est pas nécessaire de neutraliser Accutase lors du passage des cellules adhérentes. L'ajout de milieu après la séparation des cellules dilue Accutase de sorte qu'elle n'est plus en mesure de détacher les cellules. Ceci élimine le besoin d'une étape d'inactivation et permet aux techniciens de culture cellulaire de gagner du temps. Enfin, Accutase n'a pas besoin d'être aliquoté et un flacon est stable au réfrigérateur pendant 2 mois.
Applications d'Accutase
Accutase remplace directement la solution de trypsine et peut être utilisé pour le passage des lignées cellulaires. En outre, Accutase donne de bons résultats lors du détachement de cellules pour l'analyse de nombreux marqueurs de surface cellulaire par cytométrie de flux et pour le tri cellulaire. D'autres applications en aval du traitement par Accutase comprennent l'analyse des marqueurs de surface cellulaire, les essais de croissance virale, la prolifération cellulaire, les essais de migration des cellules tumorales, le passage de routine des cellules, l'augmentation de la production (bioréacteur) et la cytométrie de flux.
Composition d'Accutase
Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est un mélange enzymatique naturel avec une activité enzymatique protéolytique et collagénolytique. Il est formulé à une concentration beaucoup plus faible que la trypsine et la collagénase, ce qui le rend moins toxique et plus doux, mais tout aussi efficace.
Efficacité d'Accutase
Accutase s'est avéré efficace pour détacher les cellules primaires et les cellules souches et maintenir une viabilité cellulaire élevée par rapport aux enzymes d'origine animale telles que la trypsine. 100 % des cellules sont récupérées après 10 minutes, et il n'y a aucun inconvénient à laisser les cellules dans Accutase jusqu'à 45 minutes, grâce à l'autodigestion d'Accutase.
En résumé
En conclusion, Accutase est une solution puissante qui change la donne dans le domaine de la culture cellulaire. Grâce à sa nature douce, son efficacité et sa polyvalence, Accutase est l'alternative idéale à la trypsine. Si vous recherchez une solution fiable et efficace pour le détachement cellulaire, Accutase est la solution qu'il vous faut.75,00 €*Solution antibiotique/antimycosique (100x)Aperçu du produit
Volume : 100 ml Stockage : ≤-15°C Stérilité : Filtration stérile
Lasolution antibiotique/antimycosique (100x) est un concentré stérile, prêt à l'emploi, conçu pour réduire les risques de contamination microbienne dans les cultures cellulaires et les applications de laboratoire connexes. Cette solution 100x contient une combinaison bien établie de pénicilline, de streptomycine et d'amphotéricine B, qui fournit une activité antimicrobienne à large spectre contre les bactéries Gram-positives et Gram-négatives, les levures et les champignons filamenteux. La formulation convient aux cultures de cellules eucaryotes, aux milieux bactériens et à d'autres systèmes sensibles à la contamination, ce qui favorise des opérations de laboratoire propres et cohérentes.
Applications et avantages Optimisée pour les protocoles de recherche de routine, cette solution est largement utilisée pour maintenir des conditions aseptiques dans les flux de culture cellulaire. Elle offre des performances fiables dans les environnements sensibles à la contamination, aidant les chercheurs à réduire le risque de prolifération microbienne sans compromettre la santé des cellules ou la reproductibilité des expériences. La formulation stérile-filtrée élimine le besoin d'étapes de solubilisation supplémentaires, ce qui permet de rationaliser la préparation des milieux et de réduire la variabilité des procédures de laboratoire quotidiennes.
Utilisation et compatibilité Pour obtenir des concentrations de travail standard, diluer la solution au 1:100 dans votre milieu de culture complet. Le produit est compatible avec une large gamme de lignées cellulaires de mammifères et de milieux de base. Grâce à la disponibilité constante des stocks, les chercheurs bénéficient d'une continuité d'approvisionnement fiable et d'une planification logistique simplifiée. La solution doit être conservée à une température ≤ -15 °C et protégée des cycles répétés de congélation-décongélation pour maintenir sa stabilité. Réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.45,00 €*PBSSolution saline tamponnée au phosphate (PBS)
La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon largement utilisée dans la recherche biologique et chimique. Elle joue un rôle crucial dans le maintien de l'équilibre du pH et de l'osmolarité au cours de diverses procédures expérimentales, y compris le traitement des tissus et la culture cellulaire. Notre solution PBS est méticuleusement formulée avec des ingrédients de haute pureté afin de garantir la stabilité et la fiabilité de chaque expérience. L'osmolarité et les concentrations d'ions de notre PBS imitent étroitement celles du corps humain, ce qui la rend isotonique et non toxique pour la plupart des cellules.
Composition de notre solution PBS
Notre solution PBS est un mélange de tampons phosphatés et de solutions salines de qualité supérieure dont le pH est ajusté. À une concentration de travail de 1X, elle contient :
8000 mg/L de chlorure de sodium (NaCl)
200 mg/L Chlorure de potassium (KCl)
1150 mg/L phosphate de sodium dibasique anhydre (Na2HPO4)
200 mg/L Phosphate de potassium monobasique anhydre (KH2PO4)
Cette composition assure un pH et un équilibre ionique optimaux, convenant à une large gamme d'applications biologiques.
Applications de notre solution PBS
Notre solution PBS est idéale pour diverses applications dans la recherche biologique. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent appropriée pour la dilution de substances et le rinçage de récipients cellulaires. Les solutions PBS contenant de l'EDTA sont efficaces pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, les métaux divalents tels que le zinc ne doivent pas être ajoutés au PBS, car ils peuvent provoquer une précipitation. Dans ce cas, les tampons Good's sont recommandés. En outre, notre solution PBS est une alternative acceptable au milieu de transport viral pour le transport et le stockage des virus à ARN, y compris le SARS-CoV-2.
Contrôle de la qualité
Filtré stérilement
Stockage et durée de conservation
Stocker entre +2°C et +25°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver entre 2°C et 25°C et utiliser dans les 24 mois.
Conditions d'expédition
Température ambiante
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.
Composition
Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)
Sels
Chlorure de potassium
200
Phosphate de potassium monobasique anhydre
200
Chlorure de sodium
8000
Phosphate de sodium dibasique anhydre
115020,00 €*