Barotne 199, w: 2,7 mM stabils glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS
Barotne 199 ir universāla un plaši izmantota šūnu kultūru barotne, kas īpaši izstrādāta primāro eksplantātu audzēšanai. Šī visaptverošā barotne apvieno būtiskus vitamīnus, aminoskābes un citus faktorus, lai nodrošinātu pilnīgi noteiktu barības vielu avotu dažādiem šūnu tipiem. Tā ir īpaši piemērota netransformētām šūnām, padarot to par nenovērtējamu līdzekli bioloģiskajos pētījumos.
Barotne 199 piedāvā virkni pielietojumu šajā jomā. Ar to var efektīvi uzturēt kumulus-ocītu kompleksu (COC) un atbalstīt olšūnu nobriešanu in vitro. Turklāt to izmanto aspirācijas līniju skalošanai, vācot olšūnas no Vācijas Holšteinas govīm. Turklāt Medium 199 ir lieliska barotne no žurkām iegūtu sirds endotēlija šūnu kultivēšanai. Šie pielietojumi liecina par barotnes 199 daudzpusību un pielāgojamību dažādām eksperimentālām vajadzībām.
Vēsture
Šķīduma Nr. 199 izstrāde pagājušā gadsimta 50. gados iezīmēja ievērojamu progresu audu kultūru barotņu jomā. Pirms tās ieviešanas daudzas barotnes balstījās uz dzīvnieku izcelsmes produktiem un audu ekstraktiem. Tomēr Morgans un kolēģi radīja apvērsumu šajā jomā, formulējot pilnīgi noteiktu barības avotu šūnu kultūrām. Veicot eksperimentus ar dažādām vitamīnu, aminoskābju un citu faktoru kombinācijām, viņi atklāja, ka barotnei Nr. 199 piemīt izcilas augšanu veicinošas īpašības.
Kvalitātes kontrole
- pH = 7,2 +/- 0,02 20-25 °C temperatūrā.
- Katra partija ir pārbaudīta attiecībā uz sterilitāti un mikoplazmas un baktēriju neesamību.
Uzturēšana
- Uzglabāt ledusskapī +2°C līdz +8°C temperatūrā, tumsā. Sasaldēšana un sasilšana līdz +37 °C samazina produkta kvalitāti.
- Nesildiet barotni līdz temperatūrai, kas pārsniedz 37° C, un neizmantojiet nekontrolējamus siltuma avotus (piemēram, mikroviļņu krāsnis).
- Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, izņemiet šo daudzumu no pudeles un uzsildiet to istabas temperatūrā.
- Jebkuras barotnes, izņemot pamata barotni, derīguma termiņš ir 8 nedēļas no izgatavošanas datuma.
Sastāvs
| Sastāvdaļas | mg/l | |
| Neorganiskie sāļi | Kalcija hlorīds x 2H2O | 264,92 |
| Dzelzs (III) nitrāts x 9H2O | 0,72 | |
| Magnija sulfāts | 97,67 | |
| Kālija hlorīds | 400,00 | |
| Nātrija acetāts x 3H2O | 82,95 | |
| Nātrija hlorīds | 6,800.00 | |
| Nātrija dihidrogēnfosfāts x H2O | 140,00 | |
| Citi komponenti | Adenīna sulfāts | 10,00 |
| AMP | 0,20 | |
| ATP | 1,00 | |
| Holesterīns | 0,20 | |
| 2'-deoksiriboze | 0,50 | |
| D(+)-glikoze bezūdens | 1,000.00 | |
| Glutations (sarkans) | 0,05 | |
| Guanīns x HCl | 0,30 | |
| Hipoksantīns | 0,30 | |
| Fenola sarkanais | 10,00 | |
| D-riboze | 0,50 | |
| Timīns | 0,30 | |
| Tween 80 | 4,90 | |
| Uracils | 0,30 | |
| Ksantīns | 0,30 | |
| NaHCO3 | 2,200.00 | |
| Aminoskābes | L-alanīns | 25,00 |
| L-arginīns x HCl | 70,00 | |
| L-asparagīnskābe | 30,00 | |
| L-cisteīns x HCl x H2O | 0,10 | |
| L-cistīns | 20,00 | |
| L-glutamīns stabils | 149,00 | |
| L-glutamīnskābe | 67,00 | |
| Glicīns | 50,00 | |
| L-histidīns x HCl x H2O | 21,88 | |
| L-hidroksiprolīns | 10,00 | |
| L-izoleicīns | 20,00 | |
| L-leicīns | 60,00 | |
| L-lizīns x HCl | 70,00 | |
| L-metionīns | 15,00 | |
| L-fenilalanīns | 25,00 | |
| L-Prolīns | 40,00 | |
| L-serīns | 25,00 | |
| L-treonīns | 30,00 | |
| L-triptofāns | 10,00 | |
| L-tirozīns | 40,00 | |
| L-valīns | 25,00 | |
| Vitamīni | 4-amino benzoskābe | 0,05 |
| Askorbīnskābe | 0,05 | |
| D(+)-biotīns | 0,01 | |
| Kalciferols | 0,10 | |
| D-kalcija pantotenāts | 0,01 | |
| Holīna hlorīds | 0,50 | |
| Folijskābe | 0,01 | |
| mio-inositols | 0,05 | |
| Menadions | 0,01 | |
| Nikotīnskābe | 0.025 | |
| Nikotīnamīds | 0.025 | |
| Piridoksāls x HCl | 0.025 | |
| Piridoksols x HCl | 0.025 | |
| Riboflavīns | 0,01 | |
| DL-α-tokoferola fosfāta dinātrija sāls | 0,01 | |
| Tiamīns x HCl | 0,01 | |
| Vitamīna A acetāts | 0,14 |