HEK293 suspensijas adaptācija

Cytion's Freeze Medium CM-1 ir mūsdienīga kriokonservēšanas barotne, kas izstrādāta, lai nodrošinātu visaugstākā līmeņa šūnu dzīvotspēju un funkcionalitāti pēc atkausēšanas. Šī daudzpusīgā barotne ir piemērota plašam šūnu tipu spektram, tostarp gan cilvēku, gan dzīvnieku šūnām, padarot to par būtisku līdzekli dažādiem pētniecības lietojumiem. Izstrādāta ar rūpīgi sabalansētu krioprotektoru un svarīgāko barības vielu kombināciju, sasaldēšanas barotne CM-1 samazina ledus kristālu veidošanos un šūnu stresu sasaldēšanas procesa laikā, tādējādi saglabājot šūnu integritāti.
Freeze Medium CM-1 galvenās īpašības:

Plaša saderība: Efektīva dažādiem šūnu tipiem, tostarp primārajām šūnām, cilmes šūnām un izveidotām šūnu līnijām.
Augsta dzīvotspēja: Optimizēta, lai pēc atkausēšanas maksimāli palielinātu šūnu reģenerāciju un dzīvotspēju, nodrošinot uzticamus eksperimentu rezultātus.
Gatavs lietošanai: Ērti sagatavotas un sterilizētas tūlītējai lietošanai, samazinot sagatavošanas laiku un piesārņojuma risku.
Uzlabota stabilitāte: Uztur nemainīgu veiktspēju standarta kriokonservēšanas apstākļos, nodrošinot reproducējamus rezultātus.
Ilgs glabāšanas laiks: CM-1 ir serumu saturoša, lietošanai gatava kriokonservēšanas barotne, ko var uzglabāt ledusskapī līdz pat vienam gadam.


CM-1 izmantošana šūnu sasaldēšanai

Lai izmantotu CM-1 gan adhēzijas, gan suspensijas šūnu sasaldēšanai, izpildiet šādas darbības

Attiecībā uz adhēzīvām šūnām tās nomazgā un atdala no kultūras substrāta. Suspensijas šūnām pārejiet uz nākamo soli.
Saskaitiet šūnas, lai pārliecinātos, ka to koncentrācija ir atbilstoša.
Centrifugējiet šūnas, lai tās granulētu, pēc tam atkārtoti suspendējiet CM-1 sasaldēšanas barotnē.
Resuspendētās šūnas pārvietot kriokivās.
Pirms šūnu pārvietošanas uz ilgtermiņa uzglabāšanu izmantojiet lēnas sasaldēšanas metodi





Metode
Apraksts
Soļi





❄️
Manuāla sasaldēšana

Pakāpeniska metode, kas ietver pakāpenisku temperatūras pazemināšanu, lai nodrošinātu šūnu dzīvotspēju

1️⃣ Ievietojiet šūnas sasaldēšanas barotnē 4 °C saldētavā uz 40 minūtēm.
2️⃣ Uz 24 stundām pārvietot uz -80°C saldētavu.
3️⃣ Ilgtermiņa uzglabāšanai šūnas uzglabāt šķidrā slāpeklī



❄️
Frosty kunga izmantošana

Ērta ierīce, kas ļauj kontrolēt sasaldēšanas ātrumu bez elektriskās strāvas

1️⃣ Sagatavojiet šūnas krioviālos ar sasaldēšanas barotni.
2️⃣ Ievietojiet krioviālus Mr. Frosty konteinerā.
3️⃣ Pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli 24 stundas uzglabāt -80 °C temperatūrā



❄️
Kontrolēta ātruma saldētava

Thermo Fisher vai citu ražotāju augstas precizitātes saldētava, kas paredzēta kontrolētai temperatūras pazemināšanai

1️⃣ Ierīci ieprogrammējiet tā, lai pakāpeniski pazeminātu temperatūru.
2️⃣ Ievietojiet sagatavotās šūnas saldētavā.
3️⃣ Pēc sasaldēšanas cikla šūnas pārceliet uz šķidro slāpekli









Glabājiet krioviālus temperatūrā, kas zemāka par -130 °C, vai šķidrā slāpeklī ilgstošai uzglabāšanai.


Sastāvdaļas

Satur FBS, DMSO, glikozi, glikozi, sāļus
Buferizācijas spēja: pH = 7,2 līdz 7,6


Cytion's Freeze Medium CM-1 piedāvā uzticamu risinājumu kriokonservēšanai, nodrošinot augstu šūnu dzīvotspēju un funkcionalitāti pēc atkausēšanas visdažādākajiem pētniecības lietojumiem.

Accutase šūnu disociācijas reaģents
- maiga alternatīva tripsīnam
Accutase ir šūnu atdalīšanas šķīdums, kas izraisa revolūciju šūnu kultūru nozarē. Tas ir proteolītisko un kolagenolītisko fermentu maisījums, kas imitē tripsīna un kolagenāzes darbību. Atšķirībā no tripsīna Accutase nesatur zīdītāju vai baktēriju komponentus un ir daudz saudzīgāks pret šūnām, padarot to par ideālu risinājumu šūnu atdalīšanai no standarta audu kultūru plastmasas traukiem un ar adhēziju pārklātiem plastmasas traukiem. Šajā bloga ierakstā mēs aplūkosim Accutase priekšrocības un lietojumu, kā arī to, kā tā maina situāciju šūnu kultūru jomā.
Accutase priekšrocības
Accutase ir vairākas priekšrocības salīdzinājumā ar tradicionālajiem tripsīna šķīdumiem. Pirmkārt, to var izmantot vienmēr, kad nepieciešama saudzīga un efektīva adhēzijas šūnu līnijas atdalīšana, tādējādi tā ir tiešs tripsīna aizstājējs. Otrkārt, Accutase ļoti labi iedarbojas uz embrionālajām un neironu cilmes šūnām, un ir pierādīts, ka tā saglabā šo šūnu dzīvotspēju pēc pasāžas. Treškārt, Accutase saglabā lielāko daļu epitopu turpmākai plūsmas citometrijas analīzei, padarot to ideāli piemērotu šūnu virsmas marķieru analīzei.
Turklāt Accutase nav jāneitralizē, kad notiek adhēzijas šūnu pasāža. Pēc šūnu sadalīšanas pievienojot vairāk barotnes, Accutase tiek atšķaidīta, tāpēc tā vairs nespēj atdalīt šūnas. Tas novērš vajadzību pēc inaktivācijas posma un ietaupa laiku šūnu kultūru tehniķiem. Visbeidzot, Accutase nav nepieciešams alikvotēt, un pudele ledusskapī ir stabila 2 mēnešus.
Accutase lietojumi
Accutase ir tiešs tripsīna šķīduma aizstājējs, un to var izmantot šūnu līniju pasāžai. Turklāt Accutase labi darbojas, atdalot šūnas daudzu šūnu virsmas marķieru analīzei, izmantojot plūsmas citometriju, un šūnu šķirošanai. Citi Accutase apstrādes pakārtotie lietojumi ietver šūnu virsmas marķieru analīzi, vīrusu augšanas testu, šūnu proliferāciju, audzēja šūnu migrācijas testus, regulāru šūnu pasāžu, ražošanas palielināšanu (bioreaktors) un plūsmas citometriju.
Accutase sastāvs
Accutase nesatur zīdītāju vai baktēriju sastāvdaļas, un tā ir dabīgs fermentu maisījums ar proteolītisku un kolagenolītisku fermentu aktivitāti. Tās sastāvā ir daudz zemāka koncentrācija nekā tripsīna un kolagenāzes, tāpēc tā ir mazāk toksiska un maigāka, bet tikpat efektīva.
Accutase efektivitāte
Ir pierādīts, ka Accutase ir efektīva primāro un cilmes šūnu atdalīšanā un saglabā augstu šūnu dzīvotspēju, salīdzinot ar dzīvnieku izcelsmes fermentiem, piemēram, tripsīnu. pēc 10 minūtēm tiek atgūti 100 % šūnu, un, pateicoties Accutase autodigestijai, nav kaitējuma atstāt šūnas Accutase šķīdumā līdz pat 45 minūtēm.
Kopsavilkumā
Noslēgumā var secināt, ka Accutase ir spēcīgs risinājums, kas maina situāciju šūnu kultūru jomā. Ar savu saudzējošo raksturu, efektivitāti un daudzpusību Accutase ir ideāla alternatīva tripsīnam. Ja meklējat uzticamu un efektīvu risinājumu šūnu atdalīšanai, Accutase ir īstais risinājums.

Produkta pārskats
Tilpums: 100 ml Uzglabāšana: ≤-15°C Sterilitāte: Sterilitāte: Sterili jāfiltrē
Antibiotiku/antimikotisko līdzekļu šķīdums (100x ) ir sterils, lietošanai gatavs koncentrāts, kas paredzēts mikrobioloģiskā piesārņojuma risku samazināšanai šūnu kultūru un saistītās laboratorijās. Šis 100x šķīdums satur vispāratzītu penicilīna, streptomicīna un amfotericīna B kombināciju, kas nodrošina plaša spektra antimikrobiālu iedarbību pret grampozitīvām un gramnegatīvām baktērijām, raugiem un pavedienveida sēnītēm. Preparāts ir piemērots lietošanai eikariotisko šūnu kultūrās, bakteriālajās barotnēs un citās sistēmās, kas jutīgas pret piesārņojumu, veicinot tīras un konsekventas laboratorijas darbības.
Lietošana un priekšrocības Šis šķīdums, kas optimizēts ikdienas pētniecības protokoliem, tiek plaši izmantots, lai uzturētu aseptiskus apstākļus šūnu kultūru darba plūsmās. Tas nodrošina uzticamu veiktspēju vidē, kas jutīga pret piesārņojumu, palīdzot pētniekiem samazināt mikrobu pārmērīgas augšanas risku, neapdraudot šūnu veselību vai eksperimentālo reproducējamību. Sterilā, filtrētā formula novērš nepieciešamību pēc papildu šķīdināšanas posmiem, veicinot racionalizētu barotņu sagatavošanu un samazinot mainīgumu ikdienas laboratorijas procedūrās.
Lietošana un saderība Lai sasniegtu standarta darba koncentrācijas, atšķaidiet šķīdumu 1:100 pilnā barotnē. Produkts ir saderīgs ar plašu zīdītāju šūnu līniju un pamatnes barotņu klāstu. Pastāvīga krājumu pieejamība ļauj pētniekiem gūt labumu no uzticamas piegādes nepārtrauktības un vienkāršotas loģistikas plānošanas. Lai saglabātu šķīduma stabilitāti, tas jāuzglabā ≤ -15 °C temperatūrā un jāaizsargā no atkārtotiem sasalšanas un atkausēšanas cikliem. Tikai izmantošanai pētniecībā. Nav paredzēts lietošanai diagnostikas vai terapeitiskās procedūrās. Nav paredzēts lietošanai cilvēkiem vai dzīvniekiem.

Fosfātu buferētais fizioloģiskais šķīdums (PBS)
Fosfātu buferšķīdums (PBS) ir plaši izmantots buferšķīdums bioloģiskajos un ķīmiskajos pētījumos. Tam ir izšķiroša nozīme pH līdzsvara un osmolaritātes uzturēšanā dažādu eksperimentālu procedūru laikā, tostarp audu apstrādes un šūnu kultivēšanas laikā. Mūsu PBS šķīdums ir rūpīgi izstrādāts no augstas tīrības pakāpes sastāvdaļām, lai nodrošinātu stabilitāti un uzticamību katrā eksperimentā. Mūsu PBS šķīduma osmolaritāte un jonu koncentrācija precīzi atbilst cilvēka ķermeņa osmolaritātei un jonu koncentrācijai, tāpēc tas ir izotonisks un nav toksisks vairumam šūnu.

Mūsu PBS šķīduma sastāvs
Mūsu PBS šķīdums ir īpaši tīru fosfātu buferšķīdumu un fizioloģisko šķīdumu maisījums ar pielāgotu pH. 1X darba koncentrācijā tas satur:

8000 mg/l nātrija hlorīda (NaCl)
200 mg/l kālija hlorīda (KCl)
1150 mg/L nātrija fosfāts divbāziskais bezūdens (Na2HPO4)
200 mg/L Kālija fosfāts vienbāziskais bezūdens (KH2PO4)

Šis sastāvs nodrošina optimālu pH un jonu līdzsvaru, kas piemērots plašam bioloģisko lietojumu klāstam.

Mūsu PBS šķīduma lietojumi
Mūsu PBS šķīdums ir ideāli piemērots dažādiem lietojumiem bioloģiskajos pētījumos. Tā izotoniskās un netoksiskās īpašības padara to piemērotu vielu atšķaidīšanai un šūnu konteineru skalošanai. EDTA saturoši PBS šķīdumi ir efektīvi, lai atdalītu pielipušās un saplūdušās šūnas. Tomēr PBS nedrīkst pievienot divvērtīgos metālus, piemēram, cinku, jo tas var izraisīt nogulsnēšanos. Šādos gadījumos ieteicams izmantot Good's buferus. Turklāt mūsu PBS šķīdums ir pieņemama alternatīva vīrusu transportēšanas barotnei RNS vīrusu, tostarp SARS-CoV-2, transportēšanai un uzglabāšanai.

Kvalitātes kontrole

Sterili filtrēts


Uzglabāšana un glabāšanas laiks

Uzglabāt no gaismas pasargātā +2 °C līdz +25 °C temperatūrā.
Pēc atvēršanas uzglabāt 2°C līdz 25°C temperatūrā un izmantot 24 mēnešu laikā.


Pārvadāšanas nosacījumi

Apkārtējā temperatūra


Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī no +2°C līdz +8°C temperatūrā, tumsā. Izvairīties no sasaldēšanas un biežas sasilšanas līdz +37°C, jo tas samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni augstāk par 37°C un neizmantojiet nekontrolētus siltuma avotus, piemēram, mikroviļņu krāsnis.
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, pirms lietošanas izņemiet nepieciešamo daudzumu un uzsildiet to līdz istabas temperatūrai.

Sastāvs



Kategorija
Sastāvdaļas
Koncentrācija (mg/l)


Sāls
Kālija hlorīds
200



Kālija fosfāts monobāziskais bezūdens
200



Nātrija hlorīds
8000



Nātrija fosfāts divbāziskais bezūdens
1150

Organisms	Cilvēks
Audu	Nieres

Organisms	Cilvēks
Audu	Nieres

Organisms	Cilvēks
Audu	Nieres

Organisms	Cilvēks
Audu	Embrionālā niere

Organisms	Cilvēks
Audu	Embrionālā niere

Organisms	Cilvēks
Audu	Embrionālā niere

Organisms	Cilvēks
Audu	Augļa nieres

Organisms	Cilvēks
Audu	Augļa nieres