Medium 199, w: 2,7 mM stabilnej glutaminy, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS
Medium 199 to wszechstronne i szeroko stosowane podłoże do hodowli komórkowych, opracowane specjalnie do hodowli pierwotnych eksplantatów. Ta wszechstronna pożywka łączy w sobie niezbędne witaminy, aminokwasy i inne czynniki, aby zapewnić w pełni zdefiniowane źródło składników odżywczych dla różnych typów komórek. Jest szczególnie odpowiednia dla komórek nietransformowanych, co czyni ją nieocenionym narzędziem do badań biologicznych.
Medium 199 oferuje szereg zastosowań w tej dziedzinie. Może skutecznie utrzymywać kompleks cumulus-oocyt (COC) i wspierać dojrzewanie oocytów in vitro. Dodatkowo jest on stosowany do płukania linii aspiracyjnych podczas pobierania komórek jajowych od niemieckich krów rasy Holstein. Co więcej, Medium 199 służy jako doskonała pożywka do hodowli komórek śródbłonka serca pochodzących od szczurów. Zastosowania te pokazują wszechstronność i zdolność adaptacji Medium 199 do różnych potrzeb eksperymentalnych.
Historia
Opracowanie Medium 199 w latach 50-tych XX wieku stanowiło znaczący postęp w dziedzinie pożywek do hodowli tkankowych. Przed jej wprowadzeniem wiele podłoży hodowlanych opierało się na produktach pochodzenia zwierzęcego i ekstraktach tkankowych. Jednak Morgan i współpracownicy zrewolucjonizowali tę dziedzinę, opracowując całkowicie zdefiniowane źródło składników odżywczych dla hodowli komórkowych. Dzięki eksperymentom obejmującym różne kombinacje witamin, aminokwasów i innych czynników, odkryli oni wyjątkowe właściwości Medium 199 stymulujące wzrost.
Kontrola jakości
- pH = 7,2 +/- 0,02 w temperaturze 20-25°C.
- Każda partia została przetestowana pod kątem sterylności i nieobecności mykoplazmy i bakterii.
Konserwacja
- Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Zamrażanie i podgrzewanie do temperatury +37°C obniża jakość produktu.
- Nie podgrzewać pożywki do temperatury wyższej niż 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła (np. urządzeń mikrofalowych).
- Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy wyjąć tę ilość z butelki i ogrzać ją w temperaturze pokojowej.
- Okres trwałości dla każdej pożywki z wyjątkiem pożywki podstawowej wynosi 8 tygodni od daty produkcji.
Skład
| Składniki | mg/L | |
| Sole nieorganiczne | Chlorek wapnia x 2H2O | 264,92 |
| Azotan żelaza (III) x 9H2O | 0,72 | |
| Siarczan magnezu | 97,67 | |
| Chlorek potasu | 400,00 | |
| Octan sodu x 3H2O | 82,95 | |
| Chlorek sodu | 6,800.00 | |
| Diwodorofosforan sodu x H2O | 140,00 | |
| Inne składniki | Siarczan adeniny | 10,00 |
| AMP | 0,20 | |
| ATP | 1,00 | |
| Cholesterol | 0,20 | |
| 2'-deoksyryboza | 0,50 | |
| D(+)-glukoza bezwodna | 1,000.00 | |
| Glutation (czerwony) | 0,05 | |
| Guanina x HCl | 0,30 | |
| Hipoksantyna | 0,30 | |
| Czerwony fenol | 10,00 | |
| D-ryboza | 0,50 | |
| Tymina | 0,30 | |
| Tween 80 | 4,90 | |
| Uracyl | 0,30 | |
| Ksantyna | 0,30 | |
| NaHCO3 | 2,200.00 | |
| Aminokwasy | L-Alanina | 25,00 |
| L-arginina x HCl | 70,00 | |
| Kwas L-asparaginowy | 30,00 | |
| L-cysteina x HCl x H2O | 0,10 | |
| L-cysteina | 20,00 | |
| L-glutamina stabilna | 149,00 | |
| Kwas L-glutaminowy | 67,00 | |
| Glicyna | 50,00 | |
| L-histydyna x HCl x H2O | 21,88 | |
| L-hydroksyprolina | 10,00 | |
| L-Izoleucyna | 20,00 | |
| L-Leucyna | 60,00 | |
| L-Lizyna x HCl | 70,00 | |
| L-metionina | 15,00 | |
| L-fenyloalanina | 25,00 | |
| L-prolina | 40,00 | |
| L-seryna | 25,00 | |
| L-treonina | 30,00 | |
| L-tryptofan | 10,00 | |
| L-tyrozyna | 40,00 | |
| L-walina | 25,00 | |
| Witaminy | kwas 4-aminobenzoesowy | 0,05 |
| Kwas askorbinowy | 0,05 | |
| D(+)-biotyna | 0,01 | |
| Kalcyferol | 0,10 | |
| D-pantotenian wapnia | 0,01 | |
| Chlorek choliny | 0,50 | |
| Kwas foliowy | 0,01 | |
| mio-inozytol | 0,05 | |
| Menadion | 0,01 | |
| Kwas nikotynowy | 0.025 | |
| Nikotynamid | 0.025 | |
| Pirydoksal x HCl | 0.025 | |
| Pirydoksol x HCl | 0.025 | |
| Ryboflawina | 0,01 | |
| Sól disodowa fosforanu DL-α-tokoferolu | 0,01 | |
| Tiamina x HCl | 0,01 | |
| Octan witaminy A | 0,14 |