Médium 199, w: 2,7 mM stabilný glutamín, w: 2,2 g/l NaHCO3, w: EBSS
Médium 199 je univerzálne a široko používané médium na kultiváciu buniek špeciálne vyvinuté na kultiváciu primárnych explantátov. Toto komplexné médium kombinuje základné vitamíny, aminokyseliny a ďalšie faktory, aby poskytlo plne definovaný zdroj živín pre rôzne typy buniek. Je obzvlášť vhodné pre netransformované bunky, čo z neho robí neoceniteľný nástroj pre biologický výskum.
Médium 199 ponúka celý rad aplikácií v tejto oblasti. Dokáže účinne udržiavať komplex kumulus-oocyt (COC) a podporovať dozrievanie oocytov in vitro. Okrem toho sa používa pri oplachovaní aspiračných línií počas odberu vajíčok od nemeckých holštajnských kráv. Okrem toho médium 199 slúži ako vynikajúce médium na kultiváciu srdcových endotelových buniek získaných z potkanov. Tieto aplikácie dokazujú všestrannosť a prispôsobivosť média 199 rôznym experimentálnym potrebám.
História
Vývoj média 199 v 50. rokoch 20. storočia znamenal významný pokrok v oblasti médií na kultiváciu tkanív. Pred jeho zavedením sa mnohé kultivačné médiá spoliehali na produkty živočíšneho pôvodu a tkanivové extrakty. Morgan a jeho kolegovia však spôsobili revolúciu v tejto oblasti tým, že vytvorili úplne definovaný zdroj výživy pre bunkové kultúry. Prostredníctvom experimentov s rôznymi kombináciami vitamínov, aminokyselín a iných faktorov objavili výnimočné vlastnosti média 199 podporujúce rast.
Kontrola kvality
- pH = 7,2 +/- 0,02 pri 20 - 25 °C.
- Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií.
Údržba
- Uchovávajte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Mrazenie a zahrievanie do +37 °C minimalizuje kvalitu výrobku.
- Neohrievajte médium na viac ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné zariadenia).
- Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a zohrejte ho pri izbovej teplote.
- Trvanlivosť akéhokoľvek média okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby.
Zloženie
| Zložky | mg/l | |
| Anorganické soli | Chlorid vápenatý x 2H2O | 264,92 |
| Dusičnan železitý (III) x 9H2O | 0,72 | |
| Síran horečnatý | 97,67 | |
| Chlorid draselný | 400,00 | |
| Octan sodný x 3H2O | 82,95 | |
| Chlorid sodný | 6,800.00 | |
| Dihydrogénfosforečnan sodný x H2O | 140,00 | |
| Ostatné zložky | Adenín sulfát | 10,00 |
| AMP | 0,20 | |
| ATP | 1,00 | |
| Cholesterol | 0,20 | |
| 2'-deoxyribóza | 0,50 | |
| D(+)-glukóza bezvodá | 1,000.00 | |
| Glutatión (červený) | 0,05 | |
| Guanín x HCl | 0,30 | |
| Hypoxantín | 0,30 | |
| Fenolová červená | 10,00 | |
| D-ribóza | 0,50 | |
| Tymín | 0,30 | |
| Tween 80 | 4,90 | |
| Uracil | 0,30 | |
| Xantín | 0,30 | |
| NaHCO3 | 2,200.00 | |
| Aminokyseliny | L-alanín | 25,00 |
| L-Arginín x HCl | 70,00 | |
| Kyselina L-aspartová | 30,00 | |
| L-cysteín x HCl x H2O | 0,10 | |
| L-Cystín | 20,00 | |
| L-Glutamín stabilný | 149,00 | |
| Kyselina L-glutámová | 67,00 | |
| Glycín | 50,00 | |
| L-histidín x HCl x H2O | 21,88 | |
| L-hydroxyprolín | 10,00 | |
| L-izoleucín | 20,00 | |
| L-leucín | 60,00 | |
| L-Lyzín x HCl | 70,00 | |
| L-metionín | 15,00 | |
| L-fenylalanín | 25,00 | |
| L-Prolín | 40,00 | |
| L-serín | 25,00 | |
| L-Treonín | 30,00 | |
| L-tryptofán | 10,00 | |
| L-Tyrozín | 40,00 | |
| L-Valín | 25,00 | |
| Vitamíny | kyselina 4-amino-benzoová | 0,05 |
| Kyselina askorbová | 0,05 | |
| D(+)-Biotín | 0,01 | |
| Kalciferol | 0,10 | |
| D-pantotenát vápenatý | 0,01 | |
| Cholín chlorid | 0,50 | |
| Kyselina listová | 0,01 | |
| myo-izozitol | 0,05 | |
| Menadion | 0,01 | |
| Kyselina nikotínová | 0.025 | |
| Nikotínamid | 0.025 | |
| Pyridoxal x HCl | 0.025 | |
| Pyridoxol x HCl | 0.025 | |
| Riboflavín | 0,01 | |
| DL-α-tokoferolfosforečnan disodná soľ | 0,01 | |
| Tiamín x HCl | 0,01 | |
| Vitamín A acetát | 0,14 |