Hitri test na mikoplazmo

Mikoplazme so majhni prokariontski organizmi, ki so premajhni, da bi bili vidni v mikroskopu, in jih ni mogoče odstraniti z običajnimi antibiotičnimi reagenti. Mikoplazme lahko vplivajo na celično rast, razmnoževanje in morfologijo celičnih linij, kar lahko privede do nezanesljivih eksperimentalnih rezultatov. približno 15 do 35 % laboratorijskih celičnih kultur je okuženih z mikoplazmo. Zato se priporoča pogosta kontrola, da se zagotovi okolje brez mikoplazme.

Analitična metoda

Podjetje CLS ponuja tako kratkoročno kot dolgoročno testiranje za odkrivanje mikoplazme. V prvem primeru se vzorci testirajo takoj po prispetju, v drugem pa se začne gojenje celične kulture in celice se testirajo po 14 dneh gojenja brez antibiotikov. Testiranje na mikoplazme se izvaja z dvotočkovnim sistemom odkrivanja s kompletom za odkrivanje mikoplazme PlasmoTest™ (Invivogen) in kompletom Certus QC - mycoADVANCED (Certus).

Vzorci

• Za hitri test zagotovite najmanj 50 µl celične suspenzije, ki vsebuje 50 000 celic. Celično suspenzijo lahko pošljete pri sobni temperaturi.
• Za test Premium zagotovite najmanj 1 milijon celic v ustreznem zamrzovalnem gojišču, da zagotovite trdno in zdravo kulturo za gojenje in poznejše testiranje celic. Vzorce pošljite v suhem ledu.
• Izpolnite obrazec za vzorec za testiranje mikoplazme in ga priložite pošiljki vzorcev.

Kolorimetrični poročevalski test

Ta test je kolorimetrični test, ki temelji na celicah. V prisotnosti mikoplazme reporterska celična linija inducira signalno kaskado, ki sproži spremembo barve medija iz rdeče v modro. Preskus se izvaja v 96-delčnih večkotličnih ploščah. Signali se zaznavajo v spektrofotometru za mikroplošče pri 620-655 nm. Zaznamo vse vrste mikoplazme in aholeplazme, pa tudi druge kontaminante v celičnih kulturah, kot so bakterije.

Izotermno pomnoževanje

Izotermalna amplifikacija je hiter in zanesljiv test, ki temelji na izotermalni amplifikaciji za mikoplazmo specifične DNK v kombinaciji z detekcijo v realnem času z uporabo barvila, ki interkalira DNK. S testom je mogoče odkriti šest najpogostejših vrst, ki predstavljajo > 95 % kontaminacij: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis in A.laidlawii. Zaradi homologije zaporedja bodo zaznane tudi druge vrste mikoplazme (M.pneumoniae, M.gallisepticum in M.synoviae). Da bi ugotovili, ali je vzorec pozitiven ali negativen na mikoplazmo, preučimo temperaturo taljenja (Tm).