Preverjanje pristnosti mišjih celičnih linij (kratki tandemski repetitivi (STR))
Zaradi razširjenosti navzkrižne kontaminacije in napačne identifikacije je pristnost celic, ki se uporabljajo v znanstvenoraziskovalnih projektih, zelo zaskrbljujoča. Ocenjuje se, da približno 15-20 % vseh raziskav, ki temeljijo na celičnih linijah, poteka z napačno identificiranimi celičnimi linijami. Zato je določanje profila celične linije z analizo STR ključnega pomena za izvajanje zanesljivih in ponovljivih raziskav. Poleg tega vse več revij zahteva preverjanje celičnih linij, preden sprejmejo članek.
Naša storitev vključuje
- Preverjanje pristnosti celične linije
- Primerjavo s spletnimi podatkovnimi zbirkami
- Poročilo o analizi, pripravljeno za objavo
Enostavno uporabo spletne strani
- Prenesite obrazec za naročilo avtentikacije celičnih linij in izpolnjen ter natisnjen list priložite pošiljki vzorcev.
- Vzorce nam pošljite v oblazinjeni ovojnici na sobni temperaturi.
- Za gDNA nam pošljite ≥ 50 μl 50ng/μl gDNA v Trisu ali EDTA (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA).
- Za celične pelete nam zagotovite 1,0-5,0 milijona celic kot celični pelet. Dvakrat sperite s PBS in ponovno suspendirajte v 0,5 ml 70-90 % etanola.
Markerji
- Človeške celice so tipizirane s sistemom PowerPlex podjetja Promega z uporabo 16 markerjev STR.
- Mišje celice so tipizirane z 18 označevalci STR.
- Podganje celice so tipizirane s 14 označevalci STR in enim spolno specifičnim označevalcem.
- Pasje celice so tipizirane z 11 označevalci STR.
- Celice hrčka so tipizirane z 10 označevalci STR.
Rezultati
Rezultate boste prejeli v 2 tednih po elektronski pošti. Rezultati vključujejo primerjavo podatkov s podatkovno bazo Cellosaurus. Celična linija bo razvrščena kot avtentična ali napačno določena.
Kratke tandemske ponovitve (STR)
Motiv DNK, sestavljen iz 2-13 baz, ki se ponovi do več sto krat, je kratka tandemska ponovitev (STR). Posamezna variabilnost v številu ponovitev v STR vodi do razlik v dolžini proizvedenih fragmentov pri uporabi PCR. Celične linije se profilirajo z uporabo teh variacij v dolžini fragmentov na več lokusih.
Odkrivanje mešanic celičnih linij
Kontaminacijo ene celične linije z eno ali več dodatnimi celičnimi linijami je mogoče ugotoviti do 10-odstotne frekvence kontaminirane celične linije. Kombinacije celičnih linij običajno zagotavljajo profile STR s tremi ali več vrhovi za en ali več lokusov.