מדיום 199, w: 2.7 mM גלוטמין יציב, w: 2.2 g/L NaHCO3, w: EBSS
Medium 199 הוא מצע תרבית תאים רב-תכליתי ונפוץ, שנוצר במיוחד לגידול שתלים ראשוניים. מצע מקיף זה משלב ויטמינים חיוניים, חומצות אמינו וגורמים נוספים, כדי לספק מקור תזונה מוגדר במלואו למגוון סוגי תאים. הוא מתאים במיוחד לתאים לא-מומרים, מה שהופך אותו לכלי יקר ערך למחקר ביולוגי.
Medium 199 מציע מגוון יישומים בתחום. הוא יכול לשמור ביעילות על קומפלקס הקומולוס-אואוציט (COC) ולתמוך בהבשלה של אואוציטים במבחנה. בנוסף, היא משמשת לשטיפת קווי שאיבה במהלך איסוף ביציות מפרות הולשטיין גרמניות. יתר על כן, Medium 199 משמשת כמדיום מצוין לגידול תאי אנדותל לבביים שמקורם בחולדות. יישומים אלה מדגימים את הרבגוניות וההתאמה של Medium 199 לצרכים ניסיוניים שונים.
היסטוריה
פיתוחו של Medium 199 בשנות ה-50 סימן התקדמות משמעותית בתחום תרבית הרקמות. לפני כניסתו לשוק, תרבית הרקמות הסתמכה על מוצרים שמקורם בבעלי חיים ותמציות רקמות. עם זאת, מורגן ועמיתיו חוללו מהפכה בתחום על ידי פיתוח מקור תזונתי מוגדר לחלוטין לתרבית תאים. באמצעות ניסויים שכללו שילובים שונים של ויטמינים, חומצות אמינו וגורמים אחרים, הם גילו את התכונות הייחודיות של Medium 199 לקידום צמיחה.
בקרת איכות
- pH = 7.2 +/- 0.02 בטמפרטורה של 20-25°C.
- כל אצווה נבדקה על מנת לוודא שהיא סטרילית ונטולת מיקופלסמה וחיידקים.
תחזוקה
- יש לשמור בקירור בטמפרטורה של +2°C עד +8°C במקום חשוך. הקפאה וחימום עד +37° C פוגעים באיכות המוצר.
- אין לחמם את התמיסה ליותר מ-37°C או להשתמש במקורות חום בלתי נשלטים (כגון מכשירי מיקרוגל).
- אם יש להשתמש רק בחלק מהמדיום, יש להוציא את הכמות הדרושה מהבקבוק ולחמם אותה בטמפרטורת החדר.
- אורך חיי המדף של כל המדיום, למעט המדיום הבסיסי, הוא 8 שבועות מיום הייצור.
הרכב
| מרכיבים | מ"ג/ל | |
| מלחים אנאורגניים | כלוריד סידן x 2H2O | 264,92 |
| חנקת ברזל (III) x 9H2O | 0,72 | |
| סולפט מגנזיום | 97 | |
| אשלגן כלורי | 400 | |
| אצטט נתרן x 3H2O | 82,95 | |
| נתרן כלורי | 6,800 | |
| נתרן דיהידרוגן פוספט x H2O | 140 | |
| רכיבים אחרים | אדנין סולפט | 10 |
| AMP | 0 | |
| ATP | 1 | |
| כולסטרול | 0,20 | |
| 2'-דאוקסיריבוזה | 0,50 | |
| D(+)-גלוקוז נטול מים | 1,000 | |
| גלוטתיון (אדום) | 0,05 | |
| גואנין x HCl | 0 | |
| היפוקסנתין | 0,30 | |
| פנול אדום | 10 | |
| D-ריבוז | 0,50 | |
| תימין | 0,30 | |
| Tween 80 | 4,90 | |
| אורציל | 0,30 | |
| קסנטין | 0,30 | |
| NaHCO3 | 2,200.00 | |
| חומצות אמינו | L-אלנין | 25 |
| L-ארגינין x HCl | 70 | |
| חומצה L-אספרטית | 30 | |
| L-ציסטאין x HCl x H2O | 0 | |
| L-ציסטין | 20 | |
| L-גלוטמין יציב | 149 | |
| חומצה L-גלוטמית | 67 | |
| גליצין | 50 | |
| L-היסטידין x HCl x H2O | 21 | |
| L-הידרוקסיפרולין | 10 | |
| L-איזולאוצין | 20 | |
| L-לאוצין | 60 | |
| L-ליזין x HCl | 70 | |
| L-מתיונין | 15 | |
| L-פנילאלנין | 25 | |
| L-פרולין | 40 | |
| L-סרין | 25 | |
| L-תראונין | 30 | |
| L-טריפטופן | 10 | |
| L-טירוזין | 40 | |
| L-ואלין | 25 | |
| ויטמינים | 4-חומצה אמינו-בנזואית | 0 |
| חומצה אסקורבית | 0 | |
| D(+)-ביוטין | 0,01 | |
| קלציפרול | 0,10 | |
| D-פנטותנט סידן | 0,01 | |
| כלוריד כולין | 0,5 | |
| חומצה פולית | 0,01 | |
| מיו-אינוסיטול | 0,05 | |
| מנדיון | 0,01 | |
| חומצה ניקוטינית | 0.025 | |
| ניקוטין | 0.025 | |
| פירידוקסל x HCl | 0.025 | |
| פירידוקסול x HCl | 0.025 | |
| ריבופלבין | 0,01 | |
| DL-α-טוקופרול פוספט דיסודיום מלח | 0,01 | |
| תיאמין x HCl | 0,01 | |
| ויטמין A אצטט | 0,14 |