בדיקת מיקופלסמה מהירה

מיקופלסמות הן אורגניזמים פרוקריוטיים קטנים, קטנים מכדי שניתן יהיה לראותם במיקרוסקופ, ואינם ניתנים לחיסול באמצעות חומרים אנטיביוטיים נפוצים. מיקופלסמה עלולה להשפיע על צמיחת תאים, התרבותם ומורפולוגיית קווי תאים, מה שעלול להוביל לתוצאות ניסוי לא אמינות. כ-15% עד 35% מתרבויות התאים במעבדות מזוהמות במיקופלסמה. לכן, מומלץ לבצע בקרה תכופה על מנת להבטיח סביבה נקייה ממיקופלסמה.

שיטת ניתוח

CLS מציעה בדיקות לטווח קצר ולטווח ארוך לאיתור מיקופלסמה. בבדיקות לטווח קצר, הדגימות נבדקות מיד עם הגעתן, ואילו בבדיקות לטווח ארוך, מתחילים בגידול תרבית התאים, והם נבדקים לאחר 14 ימי גידול ללא אנטיביוטיקה. בדיקת המיקופלסמה מתבצעת באמצעות מערכת זיהוי דו-נקודתית עם ערכת PlasmoTest™ - Mycoplasma Detection Kit (Invivogen) וערכת Certus QC – mycoADVANCED detection kit (Certus).

דגימות

• לצורך הבדיקה המהירה, אנא ספקו לפחות 50 מיקרוליטר של תמיסת תאים המכילה 50,000 תאים. תמיסת התאים יכולה להישלח בטמפרטורת החדר.
• לצורך הבדיקה המורחבת, אנא ספקו מינימום של מיליון תאים במדיום הקפאה מתאים, כדי להבטיח תרבית חזקה ובריאה לגידול התאים ולבדיקתם לאחר מכן. אנא שלחו את הדגימות בקרח יבש.
• אנא מלאו את טופס דגימת הבדיקה למיקופלסמה וצרפו אותו למשלוח הדגימה.

בדיקת צבע

בדיקה זו היא בדיקה קולורימטרית מבוססת תאים. בנוכחות מיקופלסמה, קו תאים מדווח גורם לתגובת שרשרת המפעילה שינוי צבע במדיום מאדום לכחול. הבדיקה מבוצעת בצלחות רב-תאיות עם 96 תאים. האותות מזוהים בספקטרופוטומטר מיקרו-צלחת ב-620-655 ננומטר. כל מיני המיקופלסמה והאכולופלסמה, כמו גם מזהמים אחרים בתרבית התאים, כגון חיידקים, מזוהים.

הגברה איזותרמית

הגברה איזותרמית היא בדיקה מהירה ואמינה המבוססת על הגברה איזותרמית של DNA ספציפי למיקופלסמה בשילוב עם זיהוי בזמן אמת באמצעות צבען המשתלב ב-DNA. הבדיקה מסוגלת לזהות שישה מהמינים הנפוצים ביותר, המהווים יותר מ-95% מהזיהומים: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis ו-A.laidlawii. בשל ההומוגניות ברצף, יאותרו גם מינים אחרים של מיקופלסמה (M.pneumoniae, M.gallisepticum ו-M.synoviae). כדי לזהות אם הדגימה חיובית או שלילית למיקופלסמה, נבדקת טמפרטורת ההיתוך (Tm).