BV2 ląstelės

"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra naujausia kriokonservavimo terpė, sukurta siekiant užtikrinti aukščiausio lygio ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo. Ši universali terpė tinka įvairiems ląstelių tipams, įskaitant ir žmogaus, ir gyvūnų ląsteles, todėl ji yra labai svarbi priemonė įvairiems tyrimams. Sudaryta iš kruopščiai subalansuoto krioprotektorių ir pagrindinių maistinių medžiagų derinio, užšaldymo terpė CM-1 sumažina ledo kristalų susidarymą ir ląstelių stresą šaldymo proceso metu, todėl išsaugo ląstelių vientisumą.
Pagrindinės "Freeze Medium CM-1" savybės:

Platus suderinamumas: Veiksminga įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir nustatytas ląstelių linijas.
Didelis gyvybingumas: Optimizuota taip, kad po atšildymo ląstelės kuo geriau atsistatytų ir taptų gyvybingos, užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus.
Paruošta naudoti: Patogiai paruoštos ir sterilizuotos, kad būtų galima iš karto naudoti, todėl sutrumpėja paruošimo laikas ir sumažėja užteršimo rizika.
Geresnis stabilumas: Išlaikomas pastovus veikimas standartinėmis kriokonservavimo sąlygomis, užtikrinant atkuriamus rezultatus.
Ilgas galiojimo laikas: CM-1 yra serumo turinti, paruošta naudoti kriokonservavimo terpė, kurią šaldytuve galima laikyti iki vienerių metų.


CM-1 naudojimas ląstelėms šaldyti

Norėdami naudoti CM-1 adherentinėms ir suspensijos ląstelėms užšaldyti, atlikite šiuos veiksmus

Jei ląstelės yra adherentinės, nuplaukite ir atskirkite jas nuo kultūros substrato. Jei tai yra suspensijos ląstelės, pereikite tiesiai prie kito veiksmo.
Suskaičiuokite ląsteles, kad įsitikintumėte, jog jos yra tinkamos koncentracijos.
Centrifuguokite ląsteles, kad jos subyrėtų, tada vėl ištirpinkite CM-1 užšaldymo terpėje.
Resuspenduotas ląsteles perkelkite į kriokameras.
Prieš perkeldami ląsteles į ilgalaikį saugojimą, naudokite lėto šaldymo metodą





Metodas
Aprašymas
Žingsniai





❄️
Rankinis užšaldymas

Žingsnis po žingsnio taikomas metodas, kai temperatūra palaipsniui mažinama, kad būtų užtikrintas ląstelių gyvybingumas

1️⃣ Įdėkite ląsteles į užšaldymo terpę ir 40 min. palaikykite 4 °C temperatūros šaldiklyje.
2️⃣ Perkelkite į -80 °C šaldiklį 24 valandoms.
3️⃣ Ilgalaikiam saugojimui ląsteles laikykite skystame azote



❄️
"Mr. Frosty" naudojimas

Patogus prietaisas, leidžiantis kontroliuoti užšaldymo greitį be elektros energijos

1️⃣ Paruoškite ląsteles kriokūnelėse su užšaldymo terpe.
2️⃣ Įdėkite kriovialus į "Mr. Frosty" konteinerį.
3️⃣ Prieš perkeliant į skystą azotą, 24 valandas laikykite -80 °C temperatūroje



❄️
Kontroliuojamo greičio šaldiklis

Labai tikslus "Thermo Fisher" ar kitų gamintojų šaldiklis, skirtas kontroliuojamam temperatūros sumažinimui

1️⃣ Užprogramuokite prietaisą taip, kad jis palaipsniui mažintų temperatūrą.
2️⃣ Į šaldiklį įdėkite paruoštas ląsteles.
3️⃣ Po šaldymo ciklo ląsteles perkelkite į skystą azotą









Laikykite kriokūnelius žemesnėje nei -130 °C temperatūroje arba skystame azote, kad būtų galima ilgai saugoti.


Sudėtis

Sudėtyje yra FBS, DMSO, gliukozės, druskų
Buferinė geba: pH = 7,2-7,6


"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra patikimas kriokonservavimo sprendimas, užtikrinantis aukštą ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo įvairiems tyrimams.

RPMI 1640 terpė, dar žinoma kaip RPMI terpė, yra labai universali ląstelių kultūrų terpė, plačiai naudojama biologiniuose tyrimuose įvairioms žinduolių ląstelėms auginti. Šios terpės pavadinimą 1966 m. sukūrė George'as E. Moore'as, Robertas E. Gerneris ir H. Addisonas Franklinas garsiajame Roswell Park Comprehensive Cancer Center, o jos pavadinimas kilo iš Roswell Park Memorial Institute (RPMI).
Iš pradžių sukurta žmogaus leukeminėms ląstelėms auginti suspensinėse ir viensluoksnėse kultūrose, RPMI 1640 terpė, mokslininkams ir komerciniams tiekėjams ją modifikavus, tapo tinkama įvairioms žinduolių ląstelėms. Ji itin suderinama su tokiomis ląstelių linijomis kaip HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitais ir karcinomomis.
RPMI 1640 terpė išsiskiria iš kitų ląstelių kultūrų terpių dėl savo unikalios sudėties. Joje yra daug fosfatų, aminorūgščių ir vitaminų. Ypač daug biotino, vitamino B12 ir PABA, kurių nėra Eagle's Minimal Essential Medium arba Dulbecco's Modified Eagle Medium. Be to, RPMI 1640 terpėje yra gerokai didesnė vitaminų inozitolio ir cholino koncentracija. Tačiau joje nėra baltymų, lipidų ir augimo veiksnių. Todėl norint sudaryti optimalias sąlygas ląstelėms augti, paprastai reikia papildyti 10 % galvijų vaisiaus serumo (FBS).
RPMI 1640 terpės buferinė sistema priklauso nuo natrio bikarbonato, o fiziologiškai tinkamam pH palaikyti būtina 5-10 % CO2 aplinka. Šią terpę iš kitų terpių dar labiau išskiria tai, kad joje yra redukuojamosios medžiagos glutationo.
Kokybės kontrolė

Steriliai filtruota


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite 4 °C temperatūroje ir sunaudokite per 6-8 savaites.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.



Sudėtis




Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Aminorūgštys
Glicinas
10.00



L-alanil-L-gliutaminas
434.40



L-argininas
200.00



L-asparaginasH2O
56.82



L-asparagino rūgštis
20.00



L-cistinas 2HCl
65.20



L-gliutamo rūgštis
20.00



L-histidinas HClH2O
20.27



L-Hidroksi-L-Prolinas
20.00



L-izoleucinas
50.00



L-leucinas
50.00



L-lizinas HCl
40.00



L-metioninas
15.00



L-fenilalaninas
15.00



L-prolinas
20.00



L-serinas
30.00



L-treoninas
20.00



L-triptofanas
5.00



L-tirozinas 2Na 2H2O
28.83



L-Valinas
20.00


Vitaminai
p-amino benzenkarboksirūgštis
1.00



D-biotinas
0.20



Cholino chloridas
3.00



D-kalcio pantotenatas
0.25



Folio rūgštis
1.00



mio-izitolis
35.00



Nikotinamidas
1.00



Piridoksino HCl
1.00



Riboflavinas
0.20



Tiamino HCl
1.00



Vitaminas B12
0.005


Neorganinės druskos
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Kiti komponentai
D-gliukozė
2000.00



L-Glutationas redukuotas
1.00



Fenolio raudonojo natrio druska
5.30

"Accutase" ląstelių disociacijos reagentas
- švelni alternatyva tripsinui
"Accutase"
- tai ląstelių atskyrimo tirpalas, kuris iš esmės keičia ląstelių kultūrų pramonę. Tai proteolitinių ir kolagenolitinių fermentų mišinys, imituojantis tripsino ir kolagenazės veikimą. Skirtingai nei tripsino, "Accutase" sudėtyje nėra jokių žinduolių ar bakterijų komponentų ir yra daug švelnesnis ląstelėms, todėl yra idealus sprendimas įprastam ląstelių atskyrimui nuo standartinių audinių kultūrų plastikinių indų ir adhezija padengtų plastikinių indų. Šiame tinklaraščio įraše nagrinėsime "Accutase" privalumus ir panaudojimo būdus bei tai, kaip ji keičia ląstelių kultūrų kultūrų naudojimo principus.
"Accutase" privalumai
Accutase turi keletą privalumų, palyginti su tradiciniais tripsino tirpalais. Pirma, ji gali būti naudojama, kai reikia švelniai ir efektyviai atskirti bet kokią adhezyvinę ląstelių liniją, todėl ja galima tiesiogiai pakeisti tripsiną. Antra, "Accutase" labai gerai veikia embrionines ir neuronines kamienines ląsteles, be to, įrodyta, kad ji išlaiko šių ląstelių gyvybingumą ir po pasaugojimo. Trečia, "Accutase" išsaugo daugumą epitopų vėlesnei srauto citometrijos analizei, todėl ji idealiai tinka ląstelių paviršiaus žymenų analizei.
Be to, "Accutase" nereikia neutralizuoti perkeliant adherentines ląsteles. Po to, kai ląstelės padalijamos, įpilus daugiau terpės, Accutase praskiedžiama, todėl ji nebegali atskirti ląstelių. Dėl to nereikia atlikti inaktyvavimo etapo, o ląstelių kultūrų specialistai sutaupo laiko. Galiausiai "Accutase" nereikia alikvotuoti, o buteliukas šaldytuve išlieka stabilus 2 mėnesius.
Accutase" taikymas
Accutase tiesiogiai pakeičia tripsino tirpalą ir gali būti naudojama ląstelių linijų pasažavimui. Be to, "Accutase" gerai veikia atskyrus ląsteles daugelio ląstelių paviršiaus žymenų analizei naudojant srauto citometriją ir ląstelių rūšiavimui. Kiti tolesni "Accutase" apdorojimo būdai: ląstelių paviršiaus žymenų analizė, virusų augimo tyrimas, ląstelių proliferacijos, navikinių ląstelių migracijos tyrimai, įprastinis ląstelių perėjimas, gamybos didinimas (bioreaktorius) ir srauto citometrija.
Accutase sudėtis
Accutase sudėtyje nėra žinduolių ar bakterijų komponentų, tai natūralus fermentų mišinys, pasižymintis proteolitiniu ir kolagenolitiniu fermentų aktyvumu. Jo sudėtis yra daug mažesnės koncentracijos nei tripsino ir kolagenazės, todėl jis yra mažiau toksiškas ir švelnesnis, bet toks pat veiksmingas.
Accutase veiksmingumas
Įrodyta, kad "Accutase" veiksmingai atskiria pirmines ir kamienines ląsteles ir išlaiko didelį ląstelių gyvybingumą, palyginti su gyvūninės kilmės fermentais, tokiais kaip tripsinas. 100 % ląstelių atgaunama po 10 minučių, o dėl savaiminio "Accutase" virškinimo "Accutase" nekenkia palikti ląsteles "Accutase" iki 45 minučių.
Apibendrinant
Apibendrinant galima teigti, kad "Accutase" yra galingas sprendimas, kuris keičia ląstelių kultūrų žaidimo taisykles. Dėl savo švelnumo, veiksmingumo ir universalumo "Accutase" yra ideali tripsino alternatyva. Jei ieškote patikimo ir veiksmingo ląstelių atskyrimo sprendimo, "Accutase" yra jums tinkamas sprendimas.

Produkto apžvalga
Tūris: 100 ml Laikymas: ≤-15°C Sterilumas: Sterilus filtras
Antibiotikų ir antimikotinių medžiagų tirpalas (100x ) yra sterilus, paruoštas naudoti koncentratas, skirtas sumažinti mikrobinio užteršimo riziką ląstelių kultūrose ir susijusiose laboratorijose. Šiame 100x tirpale yra gerai žinomas penicilino, streptomicino ir amfotericino B derinys, užtikrinantis plataus spektro antimikrobinį veikimą prieš gramteigiamas ir gramneigiamas bakterijas, mieles ir gijinius grybelius. Preparatas tinka naudoti eukariotinių ląstelių kultūrose, bakterijų terpėse ir kitose užterštumui jautriose sistemose, taip užtikrinant švarią ir nuoseklią laboratorinę veiklą.
Taikymas ir privalumai Šis tirpalas, optimizuotas įprastiniams mokslinių tyrimų protokolams, plačiai naudojamas aseptinėms sąlygoms palaikyti ląstelių kultūrų darbo procesuose. Jis užtikrina patikimą veikimą užterštumui jautriose aplinkose, padėdamas tyrėjams sumažinti mikrobų peraugimo riziką, nepakenkiant ląstelių sveikatai ar eksperimentų atkuriamumui. Dėl steriliai filtruotos sudėties nereikia atlikti papildomų tirpinimo etapų, todėl galima supaprastinti terpės paruošimą ir sumažinti kasdienių laboratorinių procedūrų kintamumą.
Naudojimas ir suderinamumas Norint pasiekti standartinę darbinę koncentraciją, praskieskite tirpalą santykiu 1:100 į visą kultūros terpę. Produktas suderinamas su daugeliu žinduolių ląstelių linijų ir bazinių terpių. Nuolat turėdami atsargų, mokslininkai gali naudotis patikimu tiekimo tęstinumu ir supaprastintu logistikos planavimu. Tirpalas turi būti laikomas ≤ -15 °C temperatūroje ir saugomas nuo pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, kad išliktų stabilus. Skirtas tik moksliniams tyrimams. Negalima naudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Negalima naudoti žmonėms ar gyvūnams.

Fosfatu buferizuotas fiziologinis tirpalas (PBS)
Fosfatu buferizuotas fiziologinis tirpalas (PBS) yra plačiai naudojamas buferinis tirpalas biologiniuose ir cheminiuose tyrimuose. Jis atlieka svarbų vaidmenį palaikant pH pusiausvyrą ir osmoliariškumą atliekant įvairias eksperimentines procedūras, įskaitant audinių apdorojimą ir ląstelių auginimą. Mūsų PBS tirpalas yra kruopščiai sukurtas iš didelio grynumo ingredientų, kad būtų užtikrintas kiekvieno eksperimento stabilumas ir patikimumas. Mūsų PBS tirpalo osmoliariškumas ir jonų koncentracija tiksliai atitinka žmogaus organizmo osmoliariškumą ir jonų koncentraciją, todėl jis yra izotoninis ir netoksiškas daugumai ląstelių.

Mūsų PBS tirpalo sudėtis
Mūsų PBS tirpalas yra pH sureguliuotas itin grynų fosfatinių buferių ir fiziologinių tirpalų mišinys. 1X darbinės koncentracijos tirpale yra:

8000 mg/l natrio chlorido (NaCl)
200 mg/l kalio chlorido (KCl)
1150 mg/l natrio fosfato dibazinio bevandenio (Na2HPO4)
200 mg/L Kalio fosfatas vienbazis bevandenis (KH2PO4)

Ši sudėtis užtikrina optimalią pH ir jonų pusiausvyrą, tinkančią įvairioms biologinėms reikmėms.

Mūsų PBS tirpalo taikymas
Mūsų PBS tirpalas idealiai tinka įvairioms biologinių tyrimų reikmėms. Dėl izotoninių ir netoksiškų savybių jis tinka medžiagoms skiesti ir ląstelių talpykloms skalauti. PBS tirpalai, kurių sudėtyje yra EDTA, efektyviai išlaisvina prisitvirtinusias ir susitelkusias ląsteles. Tačiau į PBS negalima dėti dvivalenčių metalų, pavyzdžiui, cinko, nes tai gali sukelti nuosėdų susidarymą. Tokiais atvejais rekomenduojama naudoti Good's buferius. Be to, mūsų PBS tirpalas yra priimtina alternatyva virusų transportavimo terpei RNR virusams, įskaitant SARS-CoV-2, transportuoti ir laikyti.

Kokybės kontrolė

Steriliai filtruotas


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +25 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite nuo 2 °C iki 25 °C temperatūroje ir sunaudokite per 24 mėnesius.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.

Sudėtis



Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Druskos
Kalio chloridas
200



Kalio fosfatas monobazinis bevandenis
200



Natrio chloridas
8000



Natrio fosfatas dvibazis bevandenis
1150