Autentificering af musecellelinjer (kort tandemrepetition (STR))
På grund af udbredelsen af krydskontaminering og fejlidentifikation er ægtheden af de celler, der anvendes i videnskabelige forskningsprojekter, et stort problem. Det anslås, at ca. 15-20 % af al cellelinjebaseret forskning arbejder med fejlidentificerede cellelinjer. Derfor er det afgørende at bestemme en cellelinjes profil ved hjælp af STR-analyse for at kunne udføre pålidelig og gentagelig forskning. Derudover kræver et stigende antal tidsskrifter verificering af cellelinjer, før de accepterer en artikel.
Vores service omfatter
- Autentificering af cellelinjer
- Sammenligning med onlinedatabaser
- Publikationsklar analyserapport
Let at bruge
- Download bestillingsformularen for cellelinjeautentificering , og vedlæg det udfyldte og udskrevne ark i din prøveforsendelse.
- Send os prøverne i en polstret kuvert ved stuetemperatur.
- For gDNA skal du give os ≥ 50 μl af 50ng/μl gDNA i Tris eller EDTA (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA).
- For cellepellets skal du give os 1,0-5,0 millioner celler som en cellepellet. Vask to gange med PBS, og resuspender i 0,5 ml 70-90 % ethanol.
Markører
- Humane celler typebestemmes med PowerPlex-systemet fra Promega ved hjælp af 16 STR-markører.
- Museceller typebestemmes med 18 STR-markører.
- Rotteceller typebestemmes med 14 STR-markører og en kønsspecifik markør.
- Hundeceller er typet med 11 STR-markører.
- Hamsterceller er typet med 10 STR-markører.
Resultater
Du får resultaterne inden for 2 uger pr. e-mail. Resultaterne omfatter en sammenligning af data med Cellosaurus-databasen. Cellelinjen vil blive klassificeret som autentificeret eller fejlidentificeret.
Korte tandemgentagelser (STR'er)
Et DNA-motiv på 2-13 baser, der gentages op til flere hundrede gange, udgør en kort tandemrepetition (STR). Individuel variation i antallet af gentagelser i en STR fører til variationer i længden af de producerede fragmenter, når man anvender PCR. Cellelinjerne profileres ved hjælp af disse variationer i fragmentlængder ved flere loci.
Påvisning af blandinger af cellelinjer
Det er muligt at identificere kontaminering af en cellelinje med en eller flere andre cellelinjer ned til en frekvens på 10 % af den kontaminerende cellelinje. Cellelinjekombinationer giver typisk STR-profiler med tre eller flere toppe for en enkelt eller flere loci.