Meio 199, com: 2,7 mM de glutamina estável, com: 2,2 g/L NaHCO3, com: EBSS
O Medium 199 é um meio de cultura celular versátil e amplamente utilizado, especialmente formulado para o cultivo de explantes primários. Este meio abrangente combina vitaminas essenciais, aminoácidos e outros factores para fornecer uma fonte de nutrientes totalmente definida para uma variedade de tipos de células. É particularmente adequado para células não transformadas, tornando-o uma ferramenta inestimável para a investigação biológica.
O Medium 199 oferece uma gama de aplicações no terreno. Pode manter eficazmente o complexo cumulus-oócito (COC) e apoiar a maturação in vitro de oócitos. Além disso, é utilizado na lavagem de linhas de aspiração durante a recolha de óvulos de vacas Holstein alemãs. Além disso, o meio 199 é um excelente meio para a cultura de células endoteliais cardíacas derivadas de ratos. Estas aplicações demonstram a versatilidade e adaptabilidade do Medium 199 a várias necessidades experimentais.
Historial
O desenvolvimento do Medium 199 na década de 1950 marcou um avanço significativo nos meios de cultura de tecidos. Antes da sua introdução, muitos meios de cultura baseavam-se em produtos derivados de animais e extractos de tecidos. No entanto, Morgan e colegas revolucionaram o campo ao formularem uma fonte nutricional completamente definida para culturas de células. Através das suas experiências envolvendo diferentes combinações de vitaminas, aminoácidos e outros factores, descobriram as excepcionais propriedades promotoras de crescimento do Meio 199.
Controlo de qualidade
- pH = 7,2 +/- 0,02 a 20-25°C.
- Cada lote foi testado para esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias.
Manutenção
- Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. O congelamento e o aquecimento até +37° C minimizam a qualidade do produto.
- Não aquecer o meio a mais de 37° C nem utilizar fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas).
- Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar essa quantidade do frasco e aquecê-la à temperatura ambiente.
- O prazo de validade de qualquer meio, com exceção do meio básico, é de 8 semanas a partir da data de fabrico.
Composição
| Componentes | mg/L | |
| Sais inorgânicos | Cloreto de cálcio x 2H2O | 264,92 |
| Nitrato de ferro (III) x 9H2O | 0,72 | |
| Sulfato de magnésio | 97,67 | |
| Cloreto de potássio | 400,00 | |
| Acetato de sódio x 3H2O | 82,95 | |
| Cloreto de sódio | 6,800.00 | |
| Di-hidrogenofosfato de sódio x H2O | 140,00 | |
| Outros componentes | Sulfato de adenina | 10,00 |
| AMP | 0,20 | |
| ATP | 1,00 | |
| Colesterol | 0,20 | |
| 2'-Desoxirribose | 0,50 | |
| D(+)-Glucose anidra | 1,000.00 | |
| Glutatião (vermelho) | 0,05 | |
| Guanina x HCl | 0,30 | |
| Hipoxantina | 0,30 | |
| Vermelho de fenol | 10,00 | |
| D-Ribose | 0,50 | |
| Timina | 0,30 | |
| Tween 80 | 4,90 | |
| Uracilo | 0,30 | |
| Xantina | 0,30 | |
| NaHCO3 | 2,200.00 | |
| Aminoácidos | L-Alanina | 25,00 |
| L-Arginina x HCl | 70,00 | |
| Ácido L-aspártico | 30,00 | |
| L-cisteína x HCl x H2O | 0,10 | |
| L-Cistina | 20,00 | |
| L-Glutamina estável | 149,00 | |
| Ácido L-Glutâmico | 67,00 | |
| Glicina | 50,00 | |
| L-Histidina x HCl x H2O | 21,88 | |
| L-hidroxiprolina | 10,00 | |
| L-Isoleucina | 20,00 | |
| L-Leucina | 60,00 | |
| L-Lisina x HCl | 70,00 | |
| L-Metionina | 15,00 | |
| L-fenilalanina | 25,00 | |
| L-Prolina | 40,00 | |
| L-Serina | 25,00 | |
| L-Treonina | 30,00 | |
| L-Triptofano | 10,00 | |
| L-tirosina | 40,00 | |
| L-Valina | 25,00 | |
| Vitaminas | ácido 4-amino-benzoico | 0,05 |
| Ácido ascórbico | 0,05 | |
| D(+)-Biotina | 0,01 | |
| Calciferol | 0,10 | |
| D-Pantotenato de cálcio | 0,01 | |
| Cloreto de colina | 0,50 | |
| Ácido fólico | 0,01 | |
| myo-Inositol | 0,05 | |
| Menadiona | 0,01 | |
| Ácido nicotínico | 0.025 | |
| Nicotinamida | 0.025 | |
| Piridoxal x HCl | 0.025 | |
| Piridoxol x HCl | 0.025 | |
| Riboflavina | 0,01 | |
| Sal dissódico do fosfato de DL-α-tocoferol | 0,01 | |
| Tiamina x HCl | 0,01 | |
| Acetato de vitamina A | 0,14 |