Teste rápido para Mycoplasma

Os micoplasmas são pequenos organismos procarióticos demasiado pequenos para serem visíveis ao microscópio e não podem ser eliminados por reagentes antibióticos comuns. Os micoplasmas podem afetar o crescimento celular, a proliferação e a morfologia das linhas celulares, o que pode conduzir a resultados experimentais pouco fiáveis. Cerca de 15 a 35% das culturas de células de laboratório estão contaminadas com micoplasmas. Por conseguinte, recomenda-se um controlo frequente para garantir um ambiente livre de micoplasma.

Método de análise

A CLS oferece testes de curto e longo prazo para a deteção de micoplasma. No primeiro caso, as amostras são testadas imediatamente após a sua chegada, ao passo que no segundo caso é iniciada uma cultura celular e as células são testadas após 14 dias de cultivo sem antibióticos. O teste de micoplasma é efectuado utilizando um sistema de deteção de dois pontos com o PlasmoTest™ - Mycoplasma Detection Kit (Invivogen) e o Certus QC - mycoADVANCED detection kit (Certus).

Amostras

• Para o teste rápido, é necessário fornecer um mínimo de 50 µl de suspensão celular contendo 50.000 células. A suspensão de células pode ser enviada à temperatura ambiente.
• Para o teste premium, fornecer um mínimo de 1 milhão de células num meio de congelação adequado para assegurar uma cultura robusta e saudável para o cultivo e subsequente teste das células. Envie as amostras em gelo seco.
• Preencher o Formulário de Amostra de Teste de Micoplasma e incluí-lo no envio da amostra.

Ensaio Colorimétrico de Repetição

Este teste é um ensaio colorimétrico baseado em células. Na presença de micoplasma, uma linha celular repórter induz uma cascata de sinalização que desencadeia uma mudança de cor no meio de vermelho para azul. O ensaio é efectuado em placas multipoços de 96 poços. Os sinais são detectados num espetrofotómetro de microplacas a 620-655 nm. São detectadas todas as espécies de micoplasma e acholeplasma, mas também outros contaminantes da cultura de células, como bactérias.

Amplificação isotérmica

A amplificação isotérmica é um teste rápido e fiável baseado na amplificação isotérmica do ADN específico do micoplasma combinada com a deteção em tempo real utilizando um corante intercalante de ADN. O ensaio é capaz de detetar seis das espécies mais comuns que representam >95% das contaminações: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis e A.laidlawii. Devido à homologia das sequências, serão igualmente detectadas outras espécies de micoplasma (M.pneumoniae, M.gallisepticum e M.synoviae). Para identificar se a amostra é positiva ou negativa para micoplasma, é estudada a temperatura de fusão (Tm).