迅速マイコプラズマ検査
マイコプラズマは小さな原核生物で、顕微鏡で見るには小さすぎ、一般的な抗生物質試薬では除去できない。マイコプラズマは細胞株の細胞成長、増殖、形態学に影響を与え、信頼性の低い実験結果につながる可能性がある。実験室での細胞培養の約15～35％はマイコプラズマに汚染されている。従って、マイコプラズマのない環境を保証するために、頻繁なコントロールが推奨される。
分析方法
CLSは、マイコプラズマ検出のための短期検査と長期検査の両方を提供しています。前者では、サンプルは到着後すぐに検査されますが、後者では細胞培養が開始され、抗生物質を含まない培養を14日間行った後に検査されます。マイコプラズマ検査は、PlasmoTest™ - Mycoplasma Detection Kit (Invivogen)とCertus QC - mycoADVANCED detection kit (Certus)の両方を用いた2点検出システムで行われます。
サンプル
- 迅速検査では、50,000 個の細胞を含む 50 µl 以上の細胞懸濁液をご提供ください。細胞懸濁液は常温で発送可能です。
- プレミアム検査では、細胞の培養とその後の検査に必要な強固で健全な培養を確保するため、適切な凍結培地に100万個以上の細胞をご用意ください。サンプルはドライアイスで発送してください。
- マイコプラズマ検査用サンプルフォームに必要事項をご記入の上、サンプル発送時に同封してください。
比色レポーターアッセイ
この検査は細胞ベースの比色アッセイです。マイコプラズマの存在下で、レポーター細胞株はシグナル伝達カスケードを誘導し、培地の色を赤から青に変化させます。アッセイは96ウェルマルチウェルプレートで行われる。シグナルはマイクロプレート分光光度計で620-655 nmで検出される。マイコプラズマとアコレプラズマの全種だけでなく、バクテリアのような細胞培養中の他の汚染物質も検出される。
等温増幅法
等温増幅法は、マイコプラズマ特異的DNAの等温増幅と、DNAインターカレート色素を用いたリアルタイム検出を組み合わせた、迅速で信頼性の高い検査法である。この検査法は、汚染の95%以上を占める最も一般的な6つの種を検出することができる：M.orale、M.hyorhinis、M.arginini、M.fermentans、M.hominisおよびA.laidlawiiである。配列の相同性により、他のマイコプラズマ種も検出される（M.pneumoniae、M.gallisepticum、M.synoviae）。試料がマイコプラズマ陽性か陰性かを識別するために、融解温度（Tm）を調べる。